F-*0
F-*0 快速轉化感受態細胞

F-*0 快速轉化感受態細胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK  rpsL

(Strr)endA1 nupG
F-*0 快速轉化感受態細胞簡要說明：

*0 菌株來源于 MC1061，是目前實驗室的感受態細胞之一，基因型與 DH10B 高度類似 (DH10B 為 galE15 型，而 *0 為 galU 型)。-CMbio-
*0 生長速度快，37℃，10 小時可見克隆。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。可用于構建克隆，藍白斑篩選等實驗。-CMbio-
-CMbio-F-*0 感受態細胞經特殊工藝制作，無需 42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min 內完成轉化、 涂板操作，pUC19 質粒檢測轉化效率可達 1~5×108 cfu/μg DNA。
F-*0 快速轉化感受態細胞快速轉化操作方法  (10min)

1.  提前 15 分鐘將用到的篩選培養基平板拿到 37℃預熱 -CMbio-
2. F-*0 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質粒或連接產物）并用

手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-

3. 用 200μl 槍將感受態細胞-DNA 混合物轉移到已經 37℃預熱的 2YT 或 LB 培養基上。-CMbio-

4. 將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養至少 13 h。-CMbio-

F-*0 快速轉化感受態細胞快速熱激轉化操作方法  (25min,可提高轉化效率)
1. F- *0 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA (質粒或連接產物)并用 手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-
2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘 (晃動會降低轉化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，37℃，

200 rpm  復蘇 10 分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬)。-CMbio-

3. 將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養至少 15h。-CMbio-

F-*0 快速轉化感受態細胞注意事項：

1. F-*0 快速轉化感受態細胞也可進行熱激操作，對于>7 kb 質粒的構建，為了提高轉化效率可按以下步驟操作： F-*0 感受態細胞從-80℃拿出，插入冰中，5 分鐘后，加入目的 DNA 并用手 EP 管底輕輕混勻，冰中靜置 20 分鐘。42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰中靜置 2 分鐘。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 復蘇 30 分鐘，涂板。
2. 感受態細胞在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降 低轉化效率，混入目的 DNA 時應輕柔操作。-CMbio-
3. F- *0 快速轉化感受態細胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉化效 率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質粒的轉化效率，可按熱激轉化操 作，增加孵育步驟。-CMbio-