產品概述

間充質干細胞無血清培養基

由上海淳麥生物技術團隊精心優化的人間充質干細胞無血清培養基，經篩選配比的無血清添加物及其他輔助成分。該產品適用于人間質干細胞無血清條件的培養；可維持人間質干細胞良好的增殖速率，并保持良好的分化能力。

實驗數據：

1.使用上海淳麥生物的間充質干細胞無血清培養基培養間充質干細胞，細胞表型如何？

用流式細胞儀檢測細胞表面抗原：CD19(0.35%)、CD34(1.23%)、CD45(1.08%)呈陰性表達；CD90(99.94%)、CD105(97.02%)呈陽性表達。

2.通過臍帶組織貼塊法分離間充質干細胞需要幾天？

7-10天，可見細胞爬出；第14天，細胞可傳代；之后，每2-3天細胞可傳代一次。

【產品用途與描述】

間充質干細胞無血清培養基可用于多種來源的人類間充質干細胞的原代細胞分離及細胞傳代培養，同時還能保持其多向分化的潛能，如人骨髓間充質干細胞（BM-hMSC)、人脂肪間充質干細胞（AT-hMSC）、人臍帶間充質干細胞（UCM-hMSC）等。

使用本產品無需添加血清或血清替代物。

間充質干細胞無血清培養基化學成分明確、無血清、無動物源成分。產品批間差異小，非常適用于培養哺乳類干細胞，包括臍帶干細胞，骨髓干細胞，脂肪干細胞等間充質干細胞。產品嚴格無菌，無病毒和支原體，性能穩定，使用該培養基能使干細胞在理想營養平衡狀態下進行多代擴增而不發生分化（10代以內）。

【產品特點】

1、可維持人類間充質干細胞良好的增值速率；

2、保持良好的分化能力；

3、經過微生物檢測（細菌、真菌、霉菌及支原體）、PH檢測、滲透壓和內毒素檢測；

4、不含任何動物源的蛋白成分。

【產品規格與保存】

【產品穩定性】

1、所有的產品都需要避光保存；

2、所有產品一旦超過標簽注釋的有效期，必須放棄使用；

3、配制成*培養基后，避光保存在2-8℃可存放3-4周；

4、為了更好的使用效果，請勿對試劑進行反復凍融。

【產品主要成份】

間充質干細胞無血清培養基的主要組成成分：氨基酸，維生素、無機鹽、白蛋白，轉鐵蛋白、胰島素、微量元素等。

【產品使用方法】

1、間充質干細胞*培養基準備

將間充質干細胞無血清生長添加劑(MSCGs)在2-8℃過夜融化，按1:20比例加入基礎培養基中，即成為間充質干細胞*培養基。

溫馨提示：間充質干細胞*培養基2-8℃避光條件下，可保存30天。若小量、多次使用，建議您將間充質干細胞無血清生長添加劑(MSCGs)分裝后，保存于-20℃冰箱，可避免培養基不必要的浪費。

2、間充質干細胞復蘇（以T-75瓶為例）

①從冰箱中取出*培養基，在生物安全柜或超凈臺中吸取適量（如T-75瓶：10-15mL)*培養基沿上表面加入間充質干細胞培養瓶中，切勿沖到細胞培養瓶底面，即：細胞生長面。然后慢慢將細胞培養瓶平放，在37℃、恒溫CO2培養箱中放置5-10分鐘后使用。

溫馨提示：請嚴格按照此步驟操作，否則可能會出現細胞培養瓶中細胞生長空白區域，即所謂的“生長空洞”。多數用戶使用的不是的預包被細胞培養瓶，而是普通的細胞培養瓶或培養皿，其表面環境并不利于無血清培養環境下的間充質干細胞貼壁。37℃放置5-10分鐘，可讓培養基中的促貼壁物質更好地與細胞培養瓶底部結合，使得間充質干細胞的貼壁能力增強，降低“生長空洞”出現的概率。

②從液氮中取出凍存的間充質干細胞，迅速將凍存管放入37℃水浴中，快速融解。

溫馨提示：盡可能避免水沒過管帽，以減少污染的風險；要快速完成細胞復蘇過程（盡量控制在1分鐘內），融化過程時間過長，會造成復蘇后細胞活性較差。

③用70%-75%酒精消毒凍存管外壁，在生物安全柜或超凈臺中打開凍存管，用吸管/移液器將細胞凍存懸液緩慢移入裝有5-10mL細胞*培養基的15mL離心管中（在這一過程請盡可能避免產生氣泡）。

溫馨提示：為了減少細胞損失，往細胞凍存管中加入1mL*培養基，稍微吹打，用吸管/移液器將這1mL的細胞懸液吸入離心管中，再用吸管/移液器將離心管中的細胞輕輕吹打混勻。

④1200rpm離心5min，棄上清，加入2mL*培養基重懸細胞，臺盼藍染色計數，按密度2×10⁴cells/cm²將細胞接種至步驟①中孵育完的細胞培養瓶中，添加細胞時，將細胞培養瓶豎立，細胞懸液直接加到底部，切忌沖到細胞培養瓶底面。

⑤輕輕搖晃細胞培養器皿，使細胞均勻分布，混勻后，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養箱中靜置培養。

⑥24h后，更換新鮮的*培養基（溫育至37℃）。

3、間充質干細胞傳代（以T-75瓶為例）

①在顯微鏡下觀察細胞，當細胞融合度達到80-90%，即可傳代。

溫馨提示：細胞融合度請勿超過90%。很多傳代后的細胞大比例死亡，是由于傳代前細胞生長過密（融合度過高），導致細胞消化異常（細胞整片或成片脫落），加之隨后的不當操作（如用移液器反復吹打成片細胞使其成為單個細胞），此機械損失過程會嚴重損害細胞膜，引發大比例的細胞死亡；間充質干細胞經凍存后再次使用時，尤為明顯。

②預處理細胞培養瓶，處理方法同細胞復蘇中的步驟①。

③在生物安全柜或超凈臺中，棄去細胞培養瓶中的培養液，加入5-10mL PBS清洗細胞后棄去，再加入2mL 0.05%胰酶-EDTA消化細胞。

④在顯微鏡下觀察到細胞變圓時，立即加入5mL胰酶抑制劑終止消化。

⑤用移液器輕輕吹打瓶壁上還未*脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞*分散。

⑥將細胞懸液轉移至15mL離心管中，1200rpm離心5min。棄上清，加入2mL細胞*培養基重懸細胞，臺盼藍染色計數，按細胞密度2×10⁴cells/cm²，將細胞接種至細胞傳代②步驟中孵育完的細胞培養瓶中，添加細胞時，將細胞培養瓶豎立，細胞懸液直接加到底部，切忌沖到細胞培養瓶底面。

⑦輕輕搖晃細胞培養器皿，使細胞均勻分布，混勻后，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養箱中靜置培養。

4、間充質干細胞凍存

①用0.05%胰酶-EDTA消化待凍存的細胞，加入胰酶抑制劑終止消化并離心，重懸后進行細胞計數。

②1200rpm離心5min，棄上清。

③根據細胞計數情況，緩慢加入適量冷的無血清凍存液（無血清凍存液可即拿即用或置于冰袋備用），調整細胞密度在1×10⁶cells/mL左右。

④輕輕地重懸細胞，將重懸均勻的細胞按等份加入到滅菌的凍存管中（需提前做好標記），旋緊凍存管蓋。

⑤迅速將凍存管放入程序降溫盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃冰箱。

⑥過夜放置后，將細胞從-80℃冰箱轉移至液氮罐中長期保存。

客戶問答：

1.之前一直使用DMEM/F12+胎牛血清養的間充質干細胞，可以直接轉到上海淳麥生物的間充質干細胞無血清培養基中嗎？

含血清培養基培養的細胞轉入無血清培養基中后可正常生長，但是無血清培養基培養的細胞一般要比含血清培養基培養的細胞偏瘦。

2.之前一直用含DMEM/F12(含BSA)+血清替代物養的間充質干細胞，可以直接轉到上海淳麥生物的間充質干細胞無血清培養基中嗎？

含血清替代物培養基培養的細胞轉入無血清培養基中后可正常生長，無血清培養基培養的細胞與含血清替代物培養基培養的細胞相似。

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