Tuner(DE3)感受態細胞

Tuner(DE3)Chemically Competent Cell
產品編碼：                        保存條件： -80℃   
產品規格:

Tuner(DE3)感受態細胞基因型:

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm lacY1 (DE3)
 

Tuner(DE3)感受態細胞簡要說明:

 Tuner（DE3）菌株是BL21菌株的 lacZY基因（半乳糖苷透性酶基因）突變株，此突變導致IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞，產生更加嚴格、均一的濃度依賴。
此菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。
λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區整合于Tuner的染色體上，所以稱為Tuner（DE3） ，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。
 Tuner（DE3）感受態細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率達10⁷cfu/μg。

Tuner(DE3)感受態細胞操作說明：

1.  取100μl冰上融化的Tuner（DE3）感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
 

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

Tuner(DE3)感受態細胞注意事項:

1.   感受態細胞在冰上融化。
2.  混入質粒時應輕柔操作。
3.  轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
4.  誘導時，IPTG濃度可選（0.1-40mM均可）。
5.  為獲得需要量的蛋白，時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。
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