| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | NK-92MI（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞）(STR鑒定正確) | |||
| 細(xì)胞別稱 | NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 50歲；男性 | |||
| 組織來源 | 外周血 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 | |||
| 重要提醒 | 1.該細(xì)胞復(fù)蘇后需一周左右時間方可恢復(fù)狀態(tài)，凍存時密度盡量大些。 2.培養(yǎng)過程中有少量細(xì)胞分泌物屬于正常現(xiàn)象，不影響細(xì)胞生長。 3.傳細(xì)胞時，細(xì)胞不能在培養(yǎng)箱外放太久，小于1 h 4.重懸細(xì)胞要輕柔，不要太劇烈 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 背景介紹 | NK-92細(xì)胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細(xì)胞株。NK-92MI細(xì)胞是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92細(xì)胞的IL-2非依賴的NK細(xì)胞株。親本細(xì)胞NK-92通過微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉(zhuǎn)化。可能由于載體整合到基因組DNA中，轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的。這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細(xì)胞和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標(biāo)記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。其親本IL-2依賴的細(xì)胞株NK-92細(xì)胞及另一株同樣來源于NK-92細(xì)胞株的IL-2非依賴的細(xì)胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細(xì)胞和NK-92CI細(xì)胞這兩個變種都包含、表達(dá)并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細(xì)胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細(xì)胞不合成表達(dá)。1998年9月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體，其后代通過BM細(xì)胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后6周，用Hoechst染色、PCR和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)測試進行支原體檢測，結(jié)果都呈陰性。 | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體污染 | 無 | |||
| 保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-2408 | |||
| 培養(yǎng)基 | NK-92MI培養(yǎng)基 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 發(fā)貨方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 初步平衡 | 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，放37度培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 無須平衡，直接放入-80冰箱（不超過一周）或者液氮罐保存，建議盡早復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | 第三天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | 搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞粗略混勻，取細(xì)胞計數(shù)，按每毫升2-3×105個活細(xì)胞的細(xì)胞密度進行全換液或半換液。每48 h傳一次。 | 37℃水浴融化后，850 rpm離心5 min，棄凍存液，加入培養(yǎng)基重懸，在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，起始密度為每毫升2-3×105個細(xì)胞 | ||
| 注意事項 | 懸浮細(xì)胞收貨注意事項： 1、收貨時需鏡下拍照（看密度、狀態(tài)） 2、靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 3、換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時（使細(xì)胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。 4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 5.因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存； 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 3.由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | 凍存液：10%DMSO+50%FBS+40%培養(yǎng)基，細(xì)胞計數(shù)后，取1×106~1×107個細(xì)胞，850 rpm離心5 min，棄原培養(yǎng)基，加入1 mL凍存液，輕輕混勻，標(biāo)注封口后，放入凍存盒，置于-80℃ 24 h，隔天再置于液氮氣象。 | |||
| 注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)； 6.細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
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