| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | 貓外周血NK細胞 | |||
| 種屬來源 | 貓 | |||
| 組織來源 | 外周血 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 分離方法 | 通過密度梯度離心獲得 | |||
| 背景介紹 | 自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調節有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生。一種穩定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細胞在IL-2條件下培養20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。 自然殺傷細胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細胞調節素(leukoregulin,LR) 對NK細胞的活化和分化有正調節作用， 體外培養時加入上述細胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質激素等對NK細胞的活性有抑制作用。 | |||
| 細胞鑒定 | 經鑒定細胞純度高于90% | |||
| 支原體檢測 | 貓外周血NK細胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌 | |||
| 產品規格 | 5×105cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 培養基 | 貓外周血NK細胞專用培養基 | |||
| 培養條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞代數 | 第1代 | |||
| 產品貨期 | 現貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵） | |||
| 供應限制 | 于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養操作 | ||||
| 收貨處理 | 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態，觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置2-4h，以穩定細胞狀態 | |||
| 細胞復蘇 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。 | |||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養 | |||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | |||
| 傳代方法 | a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 -3min（視細胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。 | |||
| 細胞凍存 | 待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
備注：由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考 客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、注意事項 | ||||
| 重要提醒 | 1.培養基于4℃條件下可保存3-6個月。 2.在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。 3.傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。 4.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 | |||
| 到貨須知 | 1.收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。 | |||
| 四、售后服務 | ||||
| 重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發； 2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發； 3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發； 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發； 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封，出現污染，經核實后，重發； 6.細胞活性問題，請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染，不重發； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發； 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發； 4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片，不重發； 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發； 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發； 7.視具體情況而定。 | |||
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