一、細胞基本屬性 | ||||
細胞名稱 | 猴紅細胞 | |||
種屬來源 | 猴 | |||
組織來源 | 外周血 | |||
生長特性 | 不可凍融,每天需輕輕顛倒,將紅細胞輕輕搖起 | |||
分離方法 | 通過無菌采集抗凝血,離心后獲得紅細胞沉淀,經等量PBS洗滌 2-3次至上清透亮,最終用PBS緩沖液配置不同濃度的紅細胞 | |||
背景介紹 | 紅細胞(Erythrocytes,RBC)也稱紅血球,是血液中數量最多的一種血細胞,是脊椎動物體內通過血液運送氧氣的最主要的媒介,同時還存在免疫功能。紅細胞可以運輸氧氣,也可以運輸二氧化碳。運輸二氧化碳時血液呈暗紫色,運輸氧氣時則呈鮮紅色。紅細胞會生成于骨髓之內。紅細胞老化后,易導致血管堵塞,所以會自動返回骨髓深處,由白細胞負責銷毀;或是在經過肝臟時,被巨噬細胞分解,成為膽汁。哺乳動物的紅細胞呈兩面凹的圓餅狀,較薄。周緣較厚,故在血涂片標本上染色較淺、周圍較深。新鮮單個紅細胞為黃綠色,大量紅細胞使血液呈深紅色。成熟的紅細胞(哺乳動物)沒有細胞核和線粒體,富含血紅蛋白。依靠葡萄糖合成能量,平均直徑為9um。 | |||
細胞鑒定 | 血涂片 | |||
支原體檢測 | 猴紅細胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌 | |||
產品規格 | 5×105cells/T25或1mL凍存管 | |||
培養基 | 猴紅細胞專用培養基 | |||
培養條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
細胞代數 | 第1代 | |||
產品貨期 | 現貨,1周左右 | |||
運輸方式 | T25培養瓶/ 順豐快遞(包郵) | |||
供應限制 | 于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
特別說明 | 以下細胞培養凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
二、細胞培養操作 | ||||
收貨處理 | 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態,觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置2-4h,以穩定細胞狀態 | |||
細胞復蘇 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養基,培養過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。 | |||
傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養 | |||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | |||
傳代方法 | a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 -3min(視細胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養。 | |||
細胞凍存 | 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
備注:由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考 客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以技術服務電話: 按 2,我們隨時給予解答。 | ||||
三、注意事項 | ||||
重要提醒 | 1.培養基于4℃條件下可保存3-6個月。 2.在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。 3.傳代培養過程中,消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。 4.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 | |||
到貨須知 | 1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發,細胞是否解凍,若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。 | |||
四、售后服務 | ||||
重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等,重發; 2.收到細胞未開封,如出現污染狀況,重發; 3.收到細胞3天內,發現污染問題,經核實后,重發; 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后,絕大多數細胞未存活,經核實后,重發; 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封,出現污染,經核實后,重發; 6.細胞活性問題,請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,重發; 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染,不重發; 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好,不重發; 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; 4.細胞狀態不好,未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片,不重發; 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的,不重發; 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發; 7.視具體情況而定。 |