一、細胞基本屬性 | ||||
細胞名稱 | CRFK貓腎細胞 | |||
細胞別稱 | CrFK; Crfk; Crandell Reese Feline Kidney; Crandell Feline Kidney; CCC; Crandell's Cat Cell;貓腎細胞 | |||
種屬來源 | 貓;雌;12周齡 | |||
組織來源 | 腎,皮層;正常 | |||
生長特性 | 貼壁生長 | |||
細胞形態 | 上皮細胞樣 | |||
背景簡介 | CRFK細胞系由RAVanDeusen建立經檢測,不含牛病毒性痢疾(BVD)病毒。 | |||
細胞代數 | 10代以內 | |||
生物安全等級 | 1 | |||
細胞規格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
支原體檢測 | 無 | |||
保藏機構 | ATCC; CCL-94 ATCC; CRL-6073 BCRC; 60151 BCRJ; 0072 ECACC; | |||
培養基 | RPMI1640+10%FBS+PS | |||
培養條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
細胞貨期 | 2周左右 | |||
運輸方式 | 復蘇發貨(T25瓶免運輸費用)/ 凍存發貨(需加干冰運輸費用) 順豐快遞 | |||
供應限制 | 于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
特別說明 | 以下細胞培養凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
二、細胞培養操作 | ||||
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
收貨處理 | 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h,以便穩定細胞狀態 | 收到細胞后,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養 | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶 | ||
傳代方法 | a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,棄去消化液,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-3 min(根據細胞消化程度而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。 c、按6-8 mL/瓶補加培養基,輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心4 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養液后吹勻。 d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。 | ||
注意事項 | 1.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F象。 | 1.收貨時若發現干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,若未融化可以將細胞按正常步驟保存; 2.為保證細胞的高存活率,收到產品后,請立即解凍復蘇細胞。 | ||
到貨須知 | 1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發,細胞是否解凍,若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。 | |||
備注:客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以技術服務電話: 按 2,我們隨時給予解答。 | ||||
三、細胞凍存操作 | ||||
凍存液配方 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
細胞密度 | 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加 1 mL血清重懸細胞,進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案 | |||
四、售后服務 | ||||
重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等,重發; 2.收到細胞未開封,如出現污染狀況,重發; 3.收到細胞3天內,發現污染問題,經核實后,重發; 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后,干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后,絕大多數細胞未存活,經核實后,重發; 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后,出現污染,經核實后,重發; 6.細胞活性問題,請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,重發; 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染,不重發; 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好,不重發; 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; 4.細胞狀態不好,未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片,不重發; 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的,不重發; 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發; 7.視具體情況而定。 |