■ 組織液外泌體提取試劑盒產品簡介：
Exosome（外泌體）是活細胞分泌的直徑約為30-150nm間的膜性囊泡，其天然存在于生物的體液中，包括血液、尿液、唾液、腦脊液、乳液等。Exosome中攜帶有細胞溶質蛋白、smRNA、各種代謝酶等，參與各種細胞功能調控，有望成為多種疾病的早期診斷標志物。近期的研究發現外泌體還可以運輸核酸，參與細胞間通訊，參與細胞間的物質交換和信息交流，影響細胞的生理狀態，并與多種疾病的發生與進程密切相關。Exosome在藥物載體運輸，腫瘤生物學和基因調控研究等方向已經成為研究熱點。
Exosome Isolation Regent用于高效、快速、方便的從血漿、細胞培養上清液、尿液、組織液中體取exosome的試劑盒。僅需通過簡單操作和常規離心機即可從樣本內中獲取大量結構完整的exosome。相比傳統的超速離心法，Exosome Isolation Regent提取效率更高，更節省時間和樣本，提取的exosome可用于Western Bloting、qPCR、功能驗證、Elisa等后續實驗。

■組織液外泌體提取試劑盒試劑盒適用范圍：
本試劑盒只適用于生物組織液的外泌體提取，僅用于科學研究。

■試劑組分：


■組織液外泌體提取試劑盒保存條件：
請于4°C保存，可穩定保存一年。（可常溫運輸）

■流程介紹：
樣品預處理→沉淀外泌體→外泌體重懸→外泌體純化

■組織液外泌體提取試劑盒樣品準備：
組織液：
1收集樣品后置于冰上，2000g離心10 min，以除去殘留細胞；
2 收集上清液，10000g離心10 min，以除去細胞碎片；
3 收集上清液提取exosome或4°C保存。
注：如需進行下游核酸（DNA或RNA）相關實驗，建議樣品量不低于300 μl；如樣品是組織沖洗液，建議樣品量不低于2 ml，或采用100KD超濾管濃縮后進行外泌體提取實驗。

■ Exosomes提取：
（1）取300 μl上清液至新的離心管中，加入體積比為1：1(V樣：VA=1：1)的Exosome Isolation Regent A液；
（2）顛倒混勻3-5次后于4°C靜置5 min后 10000g 離心2 min；
（3）取上清液轉移置新的離心管中，加入體積比為1：1的Exosome Isolation Regent B液；
（4）顛倒混勻3-5次后于4°C靜置1h-2h后 13500 g 離心30 min后棄去上清液；收集沉淀，此沉淀即為外泌體；
（5）根據后續實驗加入100-200µl Exosome Isolation Regent C重懸沉淀物，進行后續實驗或-80°C保存（由于沉淀物具有一定的粘性，因此加入Exosome Isolation Regent C后室溫放置約15 min，用移液器吹打后沉淀物會自然溶解）。
注意：如對提取效率有要求，可適時延長離心時間10-30 min，但建議離心總時長不超過1h。

■ 組織液外泌體提取試劑盒常見問題：
Q1：提取的外泌體如何保存？
A1：外泌體可在2-8℃保存一周，若需長時間保存，建議放置于-80℃冰箱凍存，避免反復凍融。
Q2：如何鑒定提取的外泌體？
A2：外泌體是體細胞分泌的細胞外囊泡群體中一種，直徑一般為30-150nm，通常確定外泌體一般需要三個條件：透射電鏡（TEM）形態觀察，顆粒粒徑測定（NTA）和蛋白標志物檢測（外泌體標志蛋白有CD9、CD81、CD63、Alix、TSG101 等）。
Q3：將Exosome Isolation Reagent加入到體液樣本中后，顛倒混合。請問這一步是否可以用振蕩器劇烈震會對效果有影響？
A3：只需將Exosome Isolation與待提取樣品混合均勻即可，震蕩的強度不宜過分劇烈，劇烈震蕩會影響提取效果。
Q4：與超速離心方法相比本試劑盒提取外泌體方法有哪些優勢？
A4：本試劑盒具有操作簡單，便捷，提取效率高，可達90%以上，不需要額外儀器設備，可小體積樣本提取等特點。