Stbl3感受態(tài)細(xì)胞

Stbl3 Chemically Competent Cell
產(chǎn)品編碼：                         保存條件： -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

Stbl3感受態(tài)細(xì)胞基因型：
F- mcrB mrr hsdS20(r_B^-, m_B^-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(Str^R) xyl-5λ^-leu mtl-1 endA1+
Stbl3感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明：
Stbl3菌株來(lái)源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株。基因組含有重組酶recA13突變，可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性，不存在lacI^qZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。CMbio High5^TM系列Stbl3感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10⁸cfu/μg DNA。
Stbl3感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：

1. CMbio Stbl3感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入0.9 mL 室溫 S.O.C. 培養(yǎng)基，使用其他培養(yǎng)基會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2.  30℃，225 rpm復(fù)蘇90分鐘。 （當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)， 30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃， 225 rpm復(fù)蘇60分鐘。）

5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C. 培養(yǎng)基上。
6.將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。（若轉(zhuǎn)化control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃培養(yǎng)過(guò)夜）Stbl3感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.  CMbio 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。