F-DH5α快速轉化感受態細胞產品說明書
產品規格:

F-DH5α快速轉化感受態細胞基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1
gyrA96 relA1 phoA
F-DH5α快速轉化感受態細胞簡要說明：
CMbio-DH5α菌株是實驗室最常用的感受態細胞。缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒 DNA 的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證 了插入 DNA 的穩定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于藍、白斑篩選-CMbio-
F-DH5α感受態細胞經特殊工藝制作，無需 42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min 內完成轉化、涂板操作.

-CMbio-pUC19 質粒檢測轉化效率可達 1~5×10 8cfu/μg DNA。-CMbio-
F-DH5α快速轉化感受態細胞操作說明：
1、提前 15 分鐘將用到的篩選培養基平板拿到 37℃預熱。-CMbio-
2、F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質粒或連接產物） 并用手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-
3、用 200 μl 槍將感受態細胞-DNA 混合物轉移到已經 37℃預熱的 LB 培養基上，涂均勻，表面無水漬。
4、將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養至少 15h。

快速熱激轉化操作方法  (25min,可提高轉化效率)：

一、F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA (質粒或連接產物) 并用手 EP 管底輕輕混勻,，冰中靜置 5 分鐘。-CMbio-
二、42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘 (晃動會降低轉化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB， 37℃，200 rpm  復蘇 10 分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬)。-CMbio-
三、將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養至少 15h。
F-DH5α快速轉化感受態細胞注意事項：
（一）F-DH5α快速轉化感受態細胞也可進行熱激操作，對于>7 kb 質粒的構建，為了提高轉化效率可按以下步 驟操作：F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出，插入冰中，5 分鐘后，加入目的 DNA 并用手 EP 管底輕輕混勻，冰中 靜置 20 分鐘。42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰中靜置 2 分鐘。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 復蘇 30 分鐘，涂 板。-CMbio-
（二）感受態細胞在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存 放會降低轉化效率，混入目的 DNA 時應輕柔操作。-CMbio-
（三）F-DH5α快速轉化感受態細胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板， 轉化效率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質粒的轉化效率，可按熱激 轉化操作，增加孵育步驟。
F-DH5α快速轉化感受態細胞其他推薦：