上海淳麥生物， 感受態(tài)細胞專家

1:DH菌株

DH是一種常用于質粒克隆的菌株。E.coli DH在使用pUC系列質粒載體轉化時,可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α-互補。可用于藍白斑篩選鑒別重組菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1, hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1

2:BL21(DE3) 菌株

該菌株用于表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區(qū),該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)

3:BL21(DE3) pLysS菌株

該菌株含有質粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達T7溶菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr

4:JM109菌株

該菌株在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化或用M13 phage載體進行轉染時,由于載體DNA產生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α-互補,從而顯示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鑒別重組體菌株

基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]

5:*0菌株

該菌株適用于的DNA克隆和質粒擴增,能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定遺傳。基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74, recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG

6:HB101菌株

該菌株遺傳性能穩(wěn)定,使用方便,適用于各種基因重組實驗

基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1, galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1

7:JM110或SCS110

大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的個胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都會產生dam,dcm,從而受到甲基化的影

響.

部分限制性內切酶對甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的內切酶說明中均有說明。

大多數(shù)酶切位點的甲基化不影響切割,而有些會影響,如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列,以XbaI為例,只有在位點序列旁出現(xiàn)GA或TC,該XbaI位才會被甲基化。

而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:

(1)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識別切割位點與MboI相同;但不受甲基化影響;

(2)利用甲基化酶缺失的受體細胞進行DNA的制備,如E.coli JM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細胞內本就沒有甲基化酶,從這些細胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。

8:E.coli JM110

要排除dam,dcm甲基化的影響,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110

如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株產生的質粒,則不會被甲基化.各種感受態(tài)細胞的區(qū)別用途特征

Xl1-Blue菌株

基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIqΔ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。

特點:具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。

用途:分子克隆和質粒提取。

BL21(DE3)菌株

基因型:F–ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-)λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。

特點:該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達系統(tǒng)的外源基因的蛋白表達宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子,該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達。

用途:蛋白質表達。

BL21(DE3)ply菌株

基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-)λ(DE3) pLysS(cmR)。

特點:該菌株帶有pLysS,具有氯霉素抗性。此質粒還有表達T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能夠降低目的基

因的背景表達水平,但不干擾IPTG誘導的表達。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。

用途:蛋白質表達

DH5α菌株

基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-,λ–

特點:一種常用于質?？寺〉木辍Ｆ?Phi;80dlacZΔM15基因的表達產物與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補,可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。

用途:分子克隆、質粒提取和蛋白質表達。

JM109菌株

基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+Δ(lac-proAB) e14-

[F‘traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。

特點:部分抗性缺陷,適合重復基因表達,可用于M13克隆序列測定和藍白斑篩選。

用途:分子克隆、質粒提取和蛋白質表達。

DH10β菌株

基因型:

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR

Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ-

The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10β。

host for pUC and other α-complementation vectors; pBR322

useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues,useful for plasmid rescue procedures。

ELECTROMAX DH10β T1 CELLS

說明:

DH10β細胞是高轉化效率的E. coli,可以應用于大多數(shù)實驗應用。

DH10β基因型具有以下特點:

lacZΔM15用于重組克隆的藍/白斑篩選

消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系統(tǒng),允許構建更多具有代表性的基因組文庫(1,2) endA1突變,可以增加質粒產量和數(shù)量

率轉化大小為150 kb的質粒,用于產生cDNA或基因組文庫

DH10β可以表達tonA的基因型,tonA能夠提供對T1和T5噬菌體感染的抗性(DH10ΒT1R)。

DH10β的基因型:F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galKλ ·rpsL (StrR) nupG

DH10β T1R的基因型:F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galKλ ·rpsL (StrR) nupG tonA