詳細介紹
一.培養基及培養凍存條件準備:
- 準備RPMI-1640培養基,90%;優質胎牛血清,10%。
- 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
- 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
- 細胞處理:
- 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
- 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 將培養瓶中細胞輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液。
2. 根據細胞的生長狀態,按1:2或以上比例用新鮮培養基重懸細胞,將合適量培養液移入到T-25培養瓶中或T-75培養瓶中培養。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞直接計數后離心,用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。