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還在為小鼠懸尾實驗結果“頭疼”嗎？測試過程中這些細節您注意了嗎？
閱讀：1375 發布時間：2022-5-11小鼠懸尾測試可用于篩選潛在的抗抑郁藥物，并評估預期會影響抑郁相關行為的操作。測試時，用膠帶將老鼠的尾巴懸掛起來，使其無法逃脫或抓住附近的物體。整個測試期通常持續時間為6分鐘。懸尾實驗是藥物發現中一種有價值的工具，可用于高通量篩選潛在的抗抑郁化合物。今天，我們將和大家一起了解懸尾實驗測試過程中的細節，并特別強調可能發生的潛在問題以及如何避免這些問題。
實驗材料
懸尾箱
懸尾實驗箱通常有塑料制成，尺寸通常為高55cm*寬60cm*深11.5cm，為了防止動物相關觀察或互動，實驗箱中間有擋板將小鼠隔開來，同時保證每只小鼠的隔間足夠寬敞，小鼠不能觸碰到墻壁，每個隔間大小建議不低于這個尺寸：高55cm*寬15cm*深11.5cm。小鼠的鼻子與實驗箱地板之間的大致距離建議為 20-25 cm。
每個隔間頂部裝有一個鋁制吊桿，用于懸掛小鼠的尾巴。需要注意，如果使用大型遠交小鼠品系（例如 CD-1），則需要相應增加尾部懸吊箱的各個隔室的大小。在每個隔間的底部，放置一個可拆卸移動的鋁制托盤，用于收集動物的糞便或尿液。
膠帶
膠帶是我們日常生活中比較常見的工具，但是在懸尾測試中膠帶的選擇是至關重要的。膠帶應牢固地粘在小鼠的尾部和吊桿上，并且強度足以承受被測小鼠的重量。同時，膠帶也不應該太粘，因為我們會在每個測試結束后取下動物，避免給動物帶來疼痛應激。這里，我們建議選擇醫用膠帶，動物的尾巴皮質比較接近于人的皮膚。另外，膠帶在每個小鼠尾巴粘貼的位置也要注意，盡量保持統一。
懸尾分析軟件
懸尾分析軟件的核心算法選擇也很重要，與曠場實驗等測試不同，懸尾測試不應該追蹤動物的質心/重心。VisuTrack動物行為分析軟件（上海欣軟）通過考察小鼠四肢的真實運動情況，實時分析小鼠搖擺不動（絕望狀態）、掙扎行為等指標，自動存儲原始實驗視頻。
白噪聲發生器（可選）
噪聲發生器可以掩蓋間歇性或者突發的環境聲音。特別推薦在實驗室環境中使用噪音發生器，在這些環境中可以聽到可能會嚇到老鼠的突然響亮的噪音。在部分實驗室中，環境噪聲水平（未激活白噪聲發生器）約為 60 dB。在進行 TST 的位置激活白噪聲發生器的總聲級為 70-72 dB。但需要注意的是，這些數字僅作為示例提供，每個實驗室應根據其*的環境和情況選擇合適的噪音水平。
清潔用品
每次測試結束后，使用消毒溶液，*擦拭懸掛盒。
亞克力透明套管（可選）
為了有效防止小鼠在測試過程中長時間攀爬，可以使用亞克力套管套在小鼠尾巴上，再進行懸掛，具體方法可以參考以下視頻，效果棒棒噠！
實驗步驟
1、調節好相機，盡可能靠近動物，獲得較高清晰度的視頻
2、開啟白噪聲發生器，掩蓋外部噪聲。避免高音量，并確保所有動物使用相同級別的白噪聲。
3、將待測小鼠帶入測試房間適應，通常至少一小時。請注意，放置在同一個房間的其他動物可以感知嗅覺和超聲波信號。
4、將膠帶粘在老鼠的尾巴上。使用膠帶的標記端并確保膠帶粘在尾部并重新貼在自身上。膠帶應貼在尾巴的最末端，在膠帶外留下 2-3mm的尾巴。
5、以最短的時間，將膠帶或者老鼠尾巴固定到懸尾箱頂部的掛鉤上，因為過長時間的拖延會對小鼠有壓力。
6、使用VisuTrack軟件預先設置好的參數，實驗采集分析6分鐘。
7、將小鼠送回它們的飼養籠后，從收集盤中丟棄糞便和尿液，并用消毒溶液擦拭裝置。
VisuTrack軟件分析小鼠懸尾實驗
實驗“謎團"
1、小鼠懸尾實驗測試時長通常為6分鐘，與強迫游泳實驗不同，小鼠在懸尾實驗早期更容易表現出不動狀態。
2、測試中，只有小鼠的前肢活動，但后肢未動的情況，一律視為動物搖擺不動行為（絕望狀態）。
3、由于運動慣性，小鼠的類似“鐘擺"活動也需要一律視為動物搖擺不動行為（絕望狀態）。
4、懸尾實驗較強迫游泳實驗，沒有因浸入水中而導致體溫過低的風險，這2個實驗在靈敏度和性能存在各種重要差異，并且一項測試的結果不一定會在另一項測試中復制。
實驗差異，可參考這2篇文獻：
Cryan JF, Mombereau C, Vassout A. The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: review of pharmacological and genetic studies in mice. Neurosci. Biobehav. Rev. 2005;29:571–625.
O'Leary OF, Cryan JF. In: Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould TD, editor. Vol. 42. Humana Press; 2009. pp. 119–137.
5、TST 不建議使用體重較大的大鼠，因為這些動物僅靠尾巴支撐體重可能會很痛苦。同樣，對于異常重的小鼠（例如用于模擬肥胖的小鼠）應謹慎，在這些情況下，實驗者應尋找替代測試，例如強迫游泳測試。
6、預先用曠場實驗測量小鼠的整體活動水平很有必要，可有效防止在懸尾實驗中產生虛假結論。
