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一、訂購

賽爾瑞成提供多種大腸桿菌宿主菌，如需訂購，可提供兩種形式的宿主菌供您選擇：穿刺菌和甘油菌，貨期均是2-3天. 

穿刺菌制備方式：將菌種搖瓶活化（對數期），預先在1.5ml的EP管中加入半固體瓊脂培養基，把活化過的菌種用牙簽穿刺接種于半固體瓊脂培養基中，37℃ 培養一個晚上即可。

甘油菌制備方式：將菌種搖瓶活化，培養至對數期，取適量菌液于小管中，加入終濃度為10%-20%的滅菌甘油，混勻后即可，直接置于-80℃保存。

二、運輸及保存方式

穿刺菌的運輸及保存方式：2-8℃運輸，4℃冰箱保存一周。

甘油菌的運輸及保存方式：低于0℃運輸，-80℃冰箱長期保存，定期（1年）復壯。

三、復蘇

1. 客戶收到穿刺菌后該如何操作？

可先置于4℃保存，盡量不要超過兩周。
1周內從穿刺菌管中挑菌于LB或2YT平板劃線。然后挑取單菌落接種在LB或2YT液體培養基中，待菌液生長至對數期以后，即可取出一定體積的菌液，加入終濃度為10-20%的甘油，就得到了可長期保存的甘油菌種，可置于-80℃保存備用。

具體操作方法：
取一個滅菌過的移液器槍頭或接種牙簽，沿著穿刺管中乳白色的大腸桿菌菌體生長線插入，來回操作幾次，每次都輕微改變槍頭的方向，以盡可能的增加槍頭與菌體的接觸面。將沾了菌的槍頭或牙簽在LB或2YT平板上劃線。將劃線平板置于37℃培養箱中過夜培養以長出單菌落。次日從LB或2YT平板上挑取一個單菌落接種到LB或2YT液體培養基中，37℃搖床震蕩培養，待菌液生長至對數期以后，即可取出一定體積的菌液，加入終濃度為10-20%的甘油，就得到了可長期保存的甘油菌種，可置于-80℃保存備用。剩余菌液可繼續用于實驗工作。
注：建議挑取兩個以上單菌落制備長期保存的菌種。

2. 客戶收到甘油菌后該如何操作？

直接置于-80℃冰箱長期保存，也可分裝成小份保存。使用之前拿出解凍，搖瓶復蘇菌種即可。

具體操作方法：
常溫解凍甘油菌（部分解凍即可），取一個滅菌過的移液器槍頭或接種牙簽，蘸取甘油菌，在LB或2YT平板上劃線。將平板置于37℃培養箱中過夜培養以長出單菌落。次日從LB或2YT平板上挑取一個單菌落接種到LB或2YT液體培養基中，37℃搖床震蕩培養，即可開展后續實驗工作。
注：建議挑取兩個以上單菌落制備長期保存的菌種。

四、注意事項

1. 無論從穿刺菌還是甘油菌制備菌種，都建議先在LB或2YT平板上劃線，然后挑取一個新鮮的單菌落于液體培養基中震蕩培養。這是為了避免偶然情況下正常菌落中隱藏的突變細菌或雜菌。如果您只是簡單的從混合菌落中挑選了一團細菌，然后在液體培養基中培養，某些情況下突變的細菌有可能會接管整個培養物成為優勢菌種，從而影響您的實驗。而每個單獨的菌落就是單克隆，即它們在遺傳學上是相同的因此通過劃線挑取單克隆的方法可以很好的避免這種問題。

2. 在制備長期保存的菌種時，建議挑取兩個以上單菌落制備菌種。

3. 液體菌種制備好以后，應直接置于-70℃以下保存，而不要在-20℃或其它溫度保存，否則菌種保存期會明顯縮短。

4. 有些菌種本身有抗性，或者含有載體的菌種，則需用含有相應抗生素的LB或2YT平板或液體培養基培養，這樣保證偶然摻入的雜菌得到抑制。

附：抗生素使用終濃度
氨芐青霉素(Ampicillin)：100 μg/ml
卡那霉素(Kanamycin)：10-50 μg/ml
氯霉素(Chloramphenicol)：17-34 μg/ml
四環素(Tetracycline)：5-12.5 μg/ml
鏈霉素(Streptomycin)：50 μg/ml
(根據質粒拷貝數的高低，抗生素使用濃度可以適當調整)

賽爾瑞成可提供的大腸桿菌宿主菌列表