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安捷倫6470液質聯用檢測豆瓣醬和蠔油中的對 羥基苯甲酸酯
閱讀：36 發布時間：2024-11-28摘要：本文介紹了分別使用 Agilent 6470 三重四極桿液質聯用系統 (LC-MS/MS) 和 1200 LC-DAD檢測蠔油和豆瓣醬中 7 種對羥基苯甲酸酯的分析方法，采用兩種檢測器可滿足不同檢測限和定量限的要求。色譜柱使用 Agilent Poroshell 120 EC-C18，實現了 7 種對羥基苯甲酸酯的良好分離，前處理使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒對蠔油和豆瓣醬基質進行凈化，過程簡便、快速。分別采用 LC-MS/MS 和 LC-DAD 進行檢測時，方法檢測限分別為 5 μg/kg 和 0.5 mg/kg，定量限分別為 10 μg/kg 和 1 mg/kg。在相應的濃度范圍內各分析物的線性相關系數均大于 0.99。在蠔油和豆瓣醬中相應加標濃度下，7 種對羥基苯甲酸酯的平均加標回收率和相對標準偏差分別為 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%，準確度和精密度良好，可用于豆瓣醬和蠔油等調味品中對羥基苯甲酸酯類的分析檢測。
前言對羥基苯甲酸酯類化合物是具有防腐作用的添加劑，可有效防止霉菌、酵母菌和細菌的生長。由于不同的酯抑制細菌的能力有所不同，因此在烘焙食品、調味品、果汁和果凍等食品中常用由不同酯類組成的復配型防腐劑。在我國，GB 2760-2014[1] 規定，對羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽在調味品（如醬油、醋、蠔油等）中的最大使用量為 0.25 g/kg（以對羥基苯甲酸計），而有些國家/地區（如馬來西亞）則禁止使用，因此針對不同國家/地區的規定有必要建立滿足不同檢測限要求的分析方法。關于食品中對羥基苯甲酸酯類化合物的檢測，GB/T 5009.31-2016[2]規定使用配備 FID 的氣相色譜系統進行檢測。該方法需要首先將樣品中的對羥基苯甲酸酯用鹽酸酸化；并用乙mi多次重復提取，用飽和氯化鈉溶液和碳酸氫鈉溶液多次洗滌；濃縮近干后，用乙醇復溶；然后進樣分析。樣品前處理過程復雜、耗時，且溶劑消耗量大。SN/T 4047-2014[3] 規定的樣品前處理方法則是：用乙腈多次提取，氮吹后用 35% 甲醇水定容；然后經 LC-C18 固相萃取柱凈化，再次氮吹后用甲醇定容。該方法氮吹步驟多，同樣存在耗時較長的弊端。
本應用選擇 7 種對羥基苯甲酸酯類防腐劑（結構和 LogP 值見圖 1）作為目標化合物，以兩種比較復雜的典型調味品（即蠔油和豆瓣醬）為研究基質，使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 進行凈化，并分別采用高靈敏度 Agilent 6470 三重四極桿液質聯用系統 (LC/MS/MS) 和 1200 LC-DAD 進行檢測，該方法樣品前處理過程簡單、快速和高效，可適用不同的檢測需求。
實驗部分試劑和樣品實驗用乙腈、甲醇均為色譜純，購于北京迪馬科技有限公司；實驗用水為娃哈哈純凈水。7 種對羥基苯甲酸酯標準品 (BePure) 購于曼哈格公司，濃度均為1000 µg/mL 且以甲醇為溶劑。蠔油 和豆瓣醬樣品為市售產品。標準品制備分別取適量對羥基苯甲酸酯標準品，用乙腈配制成濃度為100 μg/mL 的混合標準工作液，逐級稀釋后備用。校準標準工作液的配制：準確移取適量的上述標準工作液，用乙腈稀釋，分別得到濃度為 1、5、10、50、 100、200 和 500 ng/mL的校準標準工作液和濃度為 0.2、0.5、1、2、5、10、50 和100 μg/mL 的校準標準工作液，分別進 LC-MS/MS 和 LC-DAD 檢測。臨用現配。
樣品前處理稱取 5 g（精確至 0.01 g）樣品于 50 mL 聚丙烯離心管中，加入陶瓷均質子；然后加入 5 mL 水和 10 mL 乙腈，渦旋振蕩 5 min；加入 Bond Elut QuEChERS EN 萃取試劑盒（部件號 5982-5650），渦旋振蕩 2 min，再以 8000 r/min 離心 5 min；取 6 mL 上清液，加入 Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒（部件號5982-5158）中，渦旋振蕩 2 min，再以 8000 r/min 離心 5 min；過 0.2 μm 尼龍微孔濾膜，待測。
MS 條件儀器配置： Agilent 6470 三重四極桿質譜儀（部件號 G6470B）離子源模式： ESI (-)干燥氣溫度： 250 °C干燥氣流速： 7 L/min鞘氣溫度： 350 °C鞘氣流速： 12 L/min霧化器壓力： 40 psi毛細管電壓： 3000 V（負）掃描模式 ： MRM（具體參數見下表 1）
結論本應用使用 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱實現了 7 種對羥基苯甲酸酯的分離，并分別采用 Agilent 6470 三重四極桿液質聯用系統 (LC-MS/MS) 和 LC-DAD 進行檢測，建立了可適用于不同檢測限和定量限要求的方法。使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 試劑盒對蠔油和豆瓣醬基質實現了高效的凈化，比現行標準方法中的樣品前處理過程更加簡便、快速。使用 LC-MS/MS 進行檢測時，在 1–500 ng/mL 的濃度范圍內各目標分析物的相關系數均大于 0.99；方法檢測限為 5 μg/kg，定量限為 10 μg/kg，在蠔油和豆瓣醬中加標濃度為 10–50 μg/kg 時，7 種對羥基苯甲酸酯的平均加標回收率和相對標準偏差分別為 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%，表現出良好的準確度和精密度。使用 LC-DAD 檢測時，在 0.2–100 μg/mL 的濃度范圍內各目標分析物的相關系數均大于 0.99；方法檢測限為 0.5 mg/kg，定量限為 1 mg/kg，在蠔油和豆瓣醬中加標濃度為 1–10 mg/kg 時，7 種對羥基苯甲酸酯的平均加標回收率和相對標準偏差分別為 74.7%–100.6% 和1.0%–3.9%，同樣表現出良好的準確度和精密度。兩種檢測方法均適用于調味品蠔油和豆瓣醬中對羥基苯甲酸酯的定量分析。