詳細介紹
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
產(chǎn)品名稱 | 豬乳頭瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Swine Papillomavirus |
編號 | BJP2946 |
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到全世界的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。定量PCR除可以對樣品的初始濃度進行準確定量外,還有其它多種豐富的應(yīng)用。還包括基因表達調(diào)控情況的分析、等位基因的分析等。
熒光定量PCR服務(wù):
豬乳頭瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒簡介:實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結(jié)果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
熒光化學物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
以下產(chǎn)品是公司正在*產(chǎn)品:
膽紅素氧化酶人膜聯(lián)蛋白-A3 Polyclonal Antibody
膽紅素氧化酶人膜聯(lián)蛋白A1( Annexin A1)Polyclonal Antibody
甘油-3-磷酸氧化酶人載脂蛋白H(APOH)Polyclonal Antibody
脂蛋白脂酶人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)Polyclonal Antibody
脂蛋白脂酶人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)Polyclonal Antibody
脂蛋白脂酶人載脂蛋白C1(APO-C1)Polyclonal Antibody
膽固醇氧化酶人Atonal蛋白的同源蛋白1(ATOH1)ELISA 試劑盒
α-L-巖藻糖苷酶人芳基硫酸酯酶A(ASA)Polyclonal Antibody
硫酸酯酶人酰輔酶A酰轉(zhuǎn)移酶1(ACAT1)Polyclonal Antibody
硫酸酯酶人α黑色素細胞刺激素(α-MSH)Polyclonal Antibody圓底試管Ratio Works™ pH sensor III *Cell-permeable*
圓底試管MEQ [6-Methoxy-N-ethylquinolinium iodide]
圓底試管SPQ [6-Methoxy-N-(3-sulfopropyl)quinolinium]
圓底試管TSQ [N-(6-Methoxy-8-quinolyl)-p-toluenesulfonamide]
圓底試管MQAE [N-(Ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium bromide]
流失細胞儀器Lucigenin [Bis-N-methylacridinium nitrate]
圓底試管Ratio Works™ redox sensor *Cell-permeable*
圓底試管DiBAC4(5) [Bis-(1,3-dibutylbarbituric acid)pentamethine oxonol]
尖底試管DiBAC4(3) [Bis-(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol]
尖底軟試管DiSBAC2(5) [Bis-(1,3-diethylthiobarbituric acid)pentamethine oxonol]