詳細介紹
實時熒光定量PCR:
鹿源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性的定量方法,已得到全世界的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。定量PCR除可以對樣品的初始濃度進行準確定量外,還有其它多種豐富的應用。還包括基因表達調控情況的分析、等位基因的分析等。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
產品名稱 | 鹿源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | 詳見說明書 |
編號 | BJP3104 |
熒光定量PCR服務:
簡介:實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請提供已知的全長基因序列。
(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。
以下產品是公司正在*產品:
周期素依賴激酶1抗體Imiquimod;咪喹莫特
細胞毒性受體NK-p46抗體3-Hydroxybenzoic acid;間羥基苯酸
細胞毒性受體NK-p44抗體Trehalose;無水海藻糖
細胞毒性受體NK-p30抗體Methyl gallate;沒食子酸酯
細胞分裂周期蛋白6抗體3,4-Dihydroxybenzoic acid;原兒茶酸
抗Jagged1/CD339抗體p-Hydroxybenzoic acid methyl ester;對羥基苯酸酯/尼泊爾金酯
細胞周期調控因子34γ-Terpinene;γ-萜品烯
周期素依賴性激酶3抗體p-Hydroxybenzoic acid;對羥基苯酸
周期素依賴性激酶9抗體Ginkgolic acids;銀杏酚酸
鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被)血竭素高氯酸鹽 標準品 20mgAck1抗體Lysionotin;石吊蘭素
β-肌動蛋白抗體Evocarpine;吳茱萸新堿
促腎上腺皮質激素抗體Ginkgolide A;銀杏內酯A
肌動蛋白α抗體Ginkgolide C;銀杏內酯C
神經絲蛋白抗體Ginkgolide B;銀杏內酯B
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型Sophoricoside;槐角苷
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7Sophoricoside;槐角苷
內收蛋白抗體Rutin;蘆
脂肪組織分化相關蛋白抗體Rutin;蘆
脂聯素受體-1抗體Rutin;蘆
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。