詳細(xì)介紹
通用原則:
1,花生源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒先選擇好探針,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴(kuò)增子的長(zhǎng)度應(yīng)不超過(guò)400bp,理想的能在100-150bp內(nèi),擴(kuò)增片斷約短,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,及在SG分析中非特異信號(hào)。
4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個(gè)連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對(duì)檢測(cè),以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測(cè)探針,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3,探針的5’端要避免有鳥(niǎo)氨酸,5’G會(huì)有淬滅作用,即使被切割下來(lái)這種淬滅作用也還會(huì)存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率,這時(shí)就應(yīng)選擇配對(duì)的另一條鏈作為探針。
6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過(guò)30個(gè)bp。
7, 檢測(cè)探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 花生源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 |
英文名稱(chēng) | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
編號(hào) | BJP3096 |
產(chǎn)品特點(diǎn):
全新的熱啟動(dòng)DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過(guò)程中抑制非特異擴(kuò)增,從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統(tǒng)熒光染料相比,對(duì)PCR反應(yīng)抑制更小,而且熒光信號(hào)更強(qiáng),檢測(cè)靈敏度更高;
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,進(jìn)而有效防止實(shí)驗(yàn)過(guò)程中PCR產(chǎn)物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實(shí)驗(yàn)所需組分,并配備2×Buffer,可完成不同類(lèi)型熒光探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),方便用戶(hù)使用;
試劑盒的通用性強(qiáng),可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和。
服務(wù)流程:
1.客戶(hù)認(rèn)真寫(xiě)好訂單,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,支付預(yù)付款(30-50%);
3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物(或客戶(hù)提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn),主要檢測(cè)引物的特異性和擴(kuò)增效率;
6.正式定量實(shí)驗(yàn):對(duì)所有樣品上機(jī)檢測(cè);
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,形成報(bào)告。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線(xiàn)圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線(xiàn)圖
2.TaqMan探針?lè)ǎ?br />探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
以下是公司*產(chǎn)品:
磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗體Anthraquinone;蒽醌
鈣/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)蛋白激酶IG抗體 Astragaloside Ⅳ;黃芪苷
Park7/DJ-1/CAP1抗體Vitamin K1;維生素K1
環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體Astragaloside II;黃芪皂苷II
碳酸酐酶1抗體Astragaloside I;黃芪皂苷I
粘附分子相關(guān)蛋白a1抗體Ciprofloxacin;環(huán)沙星
碳酸酐酶2抗體Sudan Ⅳ;蘇丹Ⅳ
半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體(人)Sudan Ⅲ;蘇紅Ⅲ
半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(C端)Menatetrenone;四烯萘醌/維生素K2
細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體Fluconazole;氟康唑 GC≥98%N-Acetylneuraminic acid;N-酰神經(jīng)氨酸/唾液酸1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Neohesperidin;新橙皮苷1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Rifampicin;利福平1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Asarinin;細(xì)辛脂素1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
3-Indolebutyric Acid;吲哚酸1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Aristolactam I;馬兜鈴內(nèi)酰胺1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Peonidin Chloride;氯化芍藥素1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Dehydroandrographolide;脫水穿心蓮內(nèi)酯1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Lamivudine;拉米夫定1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Linderane;烏藥醚內(nèi)酯1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶