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大鼠乳腺成纖維細胞

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更新時間:2023-04-23 11:00:00瀏覽次數:252

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 乳腺組織
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詳細介紹

產品屬性:

產品名稱

規格

組織來源

大鼠乳腺成纖維細胞

5×105cells/T25細胞培養瓶

乳腺組織

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自乳腺組織;乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間,淺筋膜伸向乳腺組織內形成條索狀的小葉間隔,一端連于胸肌筋膜,另一端連于皮膚,將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中。乳腺是哺乳動物少數可以重復經歷生長、功能分化和退化過程的器官之一。纖維結締組織伸入乳腺組織之間,形成許多間隔,這些纖維結締組織對乳房起固定作用,而纖維結締組織是由成纖維細胞構成的。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的乳腺成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用胰dan白 - 膠原混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細胞形態  成纖維細胞樣

傳代特性  可傳5代左右;3代以內狀態佳

消化液  0.25%胰dan白

培養條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實驗報告:

一、分離與培養:

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

 

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基,90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

內質網脂質轉運相關蛋白2抗體 ZNHIT2蛋白封閉多肽 

磷脂酰肌醇激(PI3Kβ)抗體 WDR91蛋白封閉多肽 

低分子量神經絲蛋白單克隆抗體 神經叢蛋白A3封閉多肽 

血小板衍化生長因子γ抗體 19號染色體開放閱讀框22封閉多肽 

神經突觸粘附樣分子4抗體 精氨加壓受體2封閉多肽 

FAM134A蛋白抗體 結構蛋白家族1封閉多肽 

磷化突觸融合蛋白1(Ser14)抗體 皮屑樣蛋白2封閉多肽 

磷化細胞核因子抗體 CD209b封閉多肽 

ETV3蛋白抗體 蛋白磷1調節亞單位18封閉多肽 

CD20單克隆抗體 KIAA0664蛋白封閉多肽 

多核苷磷化蛋白抗體 雙特異性磷封閉多肽18封閉多肽 

TRIM35蛋白抗體 樣蛋白1封閉多肽 

SCRIBBLE蛋白抗體 甲基化P53(Mono Methyl Lys370)封閉多肽 

交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian 核突觸蛋白-γ封閉多肽 

肌球蛋白重鏈9抗體 環指蛋白47封閉多肽 

微管相關蛋白2抗體 原鈣粘蛋白γC3封閉多肽 

腦蛋白4抗體 神經粘蛋白封閉多肽 

3號染色體開放閱讀框70抗體 組氨性磷結構域蛋白2A封閉多肽 
大鼠乳腺成纖維細胞小鼠口腔黏膜成纖維細胞5×10?Cells/T25培養瓶

小鼠肺大靜脈平滑肌細胞5×10?Cells/T25培養瓶

INS-1 (大鼠胰島細胞瘤細胞) (種屬鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+50μmol/L β-mercaptoethanol+1% P/S1×10?cells/T25培養瓶

雞小腸黏膜上皮細胞5×10?Cells/T25培養瓶

BNL 1ME A.7R.1 (小鼠肝上皮細胞)DMEM+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養瓶

大鼠腸神經嵴干細胞5×10?Cells/T25培養瓶

Hepa 1-6 (小鼠肝癌細胞) (STR鑒定正確)DMEM+10% FBS+1mM Sodium Pyruvate+1% P/S1×10?cells/T25培養瓶

 


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