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大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)

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更新時間:2023-04-21 13:57:27瀏覽次數:321

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 外周血
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詳細介紹

產品屬性:

產品名稱

規格

組織來源

大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)

5×105cells/T25細胞培養瓶

外周血

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自外周血,由外周血單核細胞誘導而成的;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態不規則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導成的單核細胞,貼壁形態多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα、LPS等誘導而成,多數呈懸浮生長, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養也可能導致自發分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進而激活T淋巴細胞,誘導免疫應答,處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節;未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產生免疫應答,不能激活T細胞的第二信號,可導致T細胞無能,從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30%以下。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養過程添加細胞因子誘導而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的經CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態等綜合鑒定,純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  半貼半懸浮

細胞形態  圓形、梭形、多角形,形態多樣

傳代特性  屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群

消化液  0.25%胰dan白

培養條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

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實驗報告:

一、分離與培養:

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

 

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基,90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

SLAP2抗體 生長因子受體結合蛋白2封閉多肽 人β-淀粉樣前體蛋白(β-APP)ELISA試劑盒

SAMD12蛋白抗體  神經元突觸膜胞外分泌調節蛋白2封閉多肽 人β淀粉樣多肽42(Aβ 42)試劑盒ELISA

前列腺雄激調節蛋白抗體 1號染色體開放閱讀框65封閉多肽 人β淀粉樣蛋白25-35(Aβ25-35)ELISA檢測試劑盒

FKRP蛋白抗體 細胞分裂核仁蛋白1封閉多肽 人β氨基己糖苷A(β-Hex A)ELISA試劑盒

腺樣癌特異性相關抗原EMC1抗體 22號染色體開放閱讀框9封閉多肽 人β4整合(ITG β4/CD104)試劑盒ELISA

G蛋白修補結構域蛋白1抗體 FAM164B蛋白封閉多肽 人β2轉鐵蛋白(β2TF)檢測試劑盒elisa

鋅指蛋白537抗體 端粒抑制因子PinX-1封閉多肽 人β2整合(ITG β2/CD11+CD18)ELISA試劑盒

豬細小病毒VP2蛋白抗體 溶質載體家族蛋白7成員3封閉多肽 人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)試劑盒ELISA

雌激相關受體β抗體 胱抑S/半胱氨抑制劑S封閉多肽 人β1腎上腺能受體(β1AR)抗體ELISA檢測試劑盒

鳥苷環化激活蛋白1抗體 黑色瘤相關抗原2封閉多肽 人β1,4-N-乙酰氨基半乳糖轉移2(B4GALNT2)ELISA試劑盒

乳脫氫LDH-C/腫瘤/睪丸抗原32抗體 熱反應蛋白12封閉多肽 人β,β胡蘿卜9',10'加氧(BCO2)試劑盒ELISA

PE標記小鼠抗人CD45單克隆抗體 CD59封閉多肽 人α-烯醇化(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)檢測試劑盒elisa

腫瘤壞死因子受體相關因子1抗體 通用轉錄因子2H亞基2C封閉多肽 人α酮戊二脫氫(α-KGDHC)ELISA試劑盒

24α7羥化抗體 磷化絲氨/蘇氨蛋白激MAK封閉多肽 人α葡萄糖苷(α-glucosidase)試劑盒ELISA

癌基因ETS2抗體 血管非炎癥分子1封閉多肽 人α肌動蛋白(α Actin)ELISA檢測試劑盒

絲裂原活化蛋白激磷p38γ抗體 神經突觸相關蛋白SLITRK6封閉多肽 人α-黑色細胞刺激(α-MSH)ELISA試劑盒

跨膜蛋白180抗體 鋅指蛋白235封閉多肽 人α-輔肌動蛋白4(ACTN-4)試劑盒ELISA

雙特異性磷抗體19抗體 H2B組蛋白家族M蛋白封閉多肽 人α-輔肌動蛋白1(ACTN-1)檢測試劑盒elisa
大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)OAR-L1綿羊肺成纖維(原代永生化)細胞專用培養基英文名稱:OAR-L1細胞專用培養基500ML

pac2斑馬魚胚胎成纖維細胞專用培養基英文名稱:pac2細胞專用培養基125ML

pac2斑馬魚胚胎成纖維細胞專用培養基英文名稱:pac2細胞專用培養基500ML

人膽囊上皮細胞永生化細胞專用培養基英文名稱:人膽囊上皮細胞永生化細胞專用培養基100ML

人膽囊上皮細胞永生化細胞專用培養基英文名稱:人膽囊上皮細胞永生化細胞專用培養基500ML

人胰腺癌相關成纖維細胞永生化細胞專用培養基英文名稱:人胰腺癌相關成纖維細胞永生化細胞專用培養基100ML

人胰腺癌相關成纖維細胞永生化細胞專用培養基英文名稱:人胰腺癌相關成纖維細胞永生化細胞專用培養基500ML

 


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