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人真皮成纖維細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-04-21 11:44:47瀏覽次數(shù):259

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來(lái)源 皮膚組織
人真皮成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞人細(xì)胞系1×106SIHa人子宮頸鱗癌細(xì)胞人細(xì)胞系1×106SJSA-1人骨肉瘤細(xì)胞人細(xì)胞系1×106SK-BR-3人乳腺癌細(xì)胞人細(xì)胞系1×106SK-BR-3+LUC人乳腺癌細(xì)胞人細(xì)胞系1×106

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來(lái)源

人真皮成纖維細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

皮膚組織

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

分離自皮膚組織內(nèi)的真皮層;皮膚組織來(lái)源包括頭部、臉部、手、腳、腿、背部、腹部、包皮等體表部位皮膚,可依據(jù)需求選用;真皮,位于表皮深層,向下與皮下組織相連,真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起,埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維,使皮膚既有彈性,又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的真皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。真皮成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括:構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài),合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。

5.方法簡(jiǎn)介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用先中性dan白消化、后胰dan白 - 膠原混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  成纖維細(xì)胞樣

傳代特性  可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

神經(jīng)膠質(zhì)蛋白(肝癌相關(guān)基因2)抗體 NBPF7蛋白封閉多肽 人血管內(nèi)皮抑抗體(ES-Ab)ELISA試劑盒

腦轉(zhuǎn)錄因子4蛋白抗體 N聚糖多肽蛋白1封閉多肽 人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型(AgtrⅠa)試劑盒ELISA

谷氨草酰乙轉(zhuǎn)氨1樣蛋白1抗體 信號(hào)誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1樣蛋白2封閉多肽 人血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA檢測(cè)試劑盒

碳酐1抗體 內(nèi)皮B受體封閉多肽 人α肌動(dòng)蛋白(αActin)elisa試劑盒

MSH同源蛋白1樣蛋白抗體 鳥(niǎo)苷環(huán)化激活蛋白1封閉多肽 人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)試劑盒elisa

細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框77封閉多肽 人瘦受體(LEPR)檢測(cè)試劑盒elisa

細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體 磷化驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白1封閉多肽 人血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)ELISA試劑盒

英文名稱: ATF4 孕激受體β(MPRβ)封閉多肽 人血管緊張Ⅱ受體1(ANGⅡR-1)試劑盒ELISA

細(xì)胞分裂周期蛋白25C抗體 腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子封閉多肽 人血管生成4(ANG-4)ELISA檢測(cè)試劑盒

磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)抗體 Lgi3蛋白封閉多肽 人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)elisa試劑盒

高爾基體自身蛋白8B抗體 鋅指蛋白ZNF919封閉多肽 人熱休克因子1(HSF-1)試劑盒elisa

乙酰化化組蛋白H2B (Lys120)鼠單克隆抗體 半乳糖基轉(zhuǎn)移2封閉多肽 人血管活性肽抑制劑(VPI)檢測(cè)試劑盒elisa

鉀電壓閥門(mén)通道混合器相關(guān)亞家族成員7抗體 FMS樣酪氨激3封閉多肽+O15197 人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)ELISA試劑盒

葉受體4抗體 鋅指蛋白321B封閉多肽 人缺血修飾白蛋白(IMA)試劑盒ELISA

磷化KB抑制蛋白激γ抗體 轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β封閉多肽 人8-異構(gòu)前列腺F2α(8-epi-PGF2α)ELISA檢測(cè)試劑盒

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白30抗體 血紅蛋白theta亞型1封閉多肽 人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)elisa試劑盒

細(xì)胞表面趨化因子受體6(CD196)抗體 平足蛋白/淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白封閉多肽 人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)試劑盒elisa

LRIG2抗體 鋅指蛋白214封閉多肽 人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-SCA)檢測(cè)試劑盒elisa
人真皮成纖維細(xì)胞MC38+LUC小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光標(biāo)記英文名稱:MC38+LUC1×106DMEM+10%FBS+1%L-+1%NEAA+1%鈉+1% HEPES+1%P/S (MC38鼠源鑒定)報(bào)告

MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細(xì)胞英文名稱:MC3T3-E11×106MEMα+10%FBS+1%P/S  (STR鼠源鑒定)報(bào)告

MC3T3-E1subclone 14小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14英文名稱:MC3T3-E1subclone 141×106MEMα(添加NaHCO3 1.5g/L+肌醇 43.2mg/L+葉 8.82mg/L+β-巰基乙醇 7.8mg/L)+ FBS 10%+P/S 1%(STR鼠源鑒定)報(bào)告

MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞英文名稱:MEF1×106D/F12+10%FBS+1%P/S  (非永生化)提供免疫熒光鑒定報(bào)告

MEF(絲裂霉C處理)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞英文名稱:MEF(絲裂霉C處理)1×106D/F12+10%FBS+1%P/S 不提供STR鑒定報(bào)告

MFC小鼠前胃癌細(xì)胞英文名稱:MFC1×1061640+10%FBS+1%P/S (STR鼠源鑒定)報(bào)告

MH-S小鼠肺泡巨噬細(xì)胞英文名稱:MH-S1×1061640+10%FBS+0.05mM 巰基乙醇(β-Me)+1%P/s(STR鼠源鑒定)報(bào)告

 


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