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大鼠牙周膜成纖維細胞

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更新時間:2023-04-23 08:54:52瀏覽次數:276

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 牙周膜組織
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詳細介紹

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產品屬性:

產品名稱

規格

組織來源

大鼠牙周膜成纖維細胞

5×105cells/T25細胞培養瓶

牙周膜組織

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自牙周膜組織;牙周膜(牙周韌帶、牙周間隙)是由致密結締組織所構成。多數纖維排列成束,纖維的一端埋于牙骨質內,另一端則埋于牙槽窩骨壁里,使牙齒固位于牙槽窩內;牙周膜內有神經、血管、淋巴和上皮細胞等。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的牙周膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖維細胞(PLFs)作為牙周膜的主體細胞,是牙周膜主要的間質細胞,它不僅具有合成膠原、基質、彈力纖維和糖蛋白的功能,還有吸收膠原吞噬異物的能力,還參與了牙周組織的病變、修復及再生過程?,F在,利用牙周膜細胞建立體外模型,已經成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用膠原 - 胰dan白聯合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細胞形態  成纖維細胞樣

傳代特性  可傳5代左右;3代以內狀態佳

消化液  0.25%胰dan白

培養條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基,90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

實驗報告:

一、分離與培養:

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大??;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

 

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

配對盒基因1抗體 重組人β2-微球蛋白蛋白 

整合樣金屬與樣3蛋白抗體 Ki67蛋白封閉多肽 

短蛋白聚糖抗體 重組人CHI3L1蛋白 

三磷腺苷依賴解旋DDX23抗體 絲/蘇氨蛋白質激II α封閉多肽 

ELMOD2蛋白抗體 鋅指蛋白134封閉多肽 

磷化堿性成纖維細胞生長因子受體1(CD331)抗體 粘蛋白15封閉多肽 

泛樣蛋白抗體 HTF9C蛋白封閉多肽 

二磷腺苷核糖基轉移5抗體 DHX37蛋白封閉多肽 

KIAA1467蛋白抗體 ATP依賴RNA解旋DDX52封閉多肽 

卵透明帶糖蛋白2抗體 染色體結構維持蛋白1封閉多肽 

葡萄膜自身抗原Uaca抗體 血管緊張原封閉多肽 

類固醇受體復合物蛋白FKBP5抗體 轉運蛋白SEC31B封閉多肽 

液泡蛋白分選蛋白28抗體 長壽相關基因lASS4封閉多肽 

防御β-108B/β-defensin 108B抗體 雄激受體相互作用蛋白4封閉多肽 

微管卷曲蛋白SYNC抗體 重組人微管相關蛋白Tau-4 

4-磷磷脂酰肌醇5激1樣蛋白抗體 磷化KLF5封閉多肽 

MX1抗體 白細胞介-7受體a封閉多肽 

蛋白激Aγ抗體 磺酰脲類藥物受體1封閉多肽 
大鼠牙周膜成纖維細胞上皮細胞培養基100mL上皮細胞培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持上皮細胞佳的生長狀態。本產品中已包含上皮細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于上皮細胞的體外培養。

DMEM高糖 (含HEPES、雙抗,不含鈉)500mL-

Leibovitz's L-15(含L-丙氨酰-L-)500mL-

小鼠肺大動脈內皮細胞培養基100mL小鼠肺大動脈內皮細胞培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持小鼠肺大動脈內皮細胞佳的生長狀態。本產品中已包含小鼠肺大動脈內皮細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于小鼠肺大動脈內皮細胞的體外培養。

MDA-MB-415細胞專用培養基(DMEM)125mL×4MDA-MB-415細胞專用培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持MDA-MB-415細胞佳的生長狀態。本產品中已包含MDA-MB-415細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于MDA-MB-415細胞的體外培養。

McCoy's 5A(不含L-)500mL-

MCF-7/Taxol細胞專用培養基125mL×4MCF-7/Taxol細胞專用培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持MCF-7/Taxol細胞佳的生長狀態。本產品中已包含MCF-7/Taxol細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于MCF-7/Taxol細胞的體外培養。


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