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大鼠視網膜色素上皮細胞

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更新時間:2023-04-23 10:57:40瀏覽次數:252

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 視網膜組織
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詳細介紹

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產品屬性:

產品名稱

規格

組織來源

大鼠視網膜色素上皮細胞

5×105cells/T25細胞培養瓶

視網膜組織

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自視網膜組織;視網膜居于眼球壁的內層,是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連,由色素上皮細胞組成,它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層,由外向內分別為:色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜,有感光作用;后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。第一神經元是視細胞層,專司感光,它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上,而視錐細胞則在中心凹處多。第二層叫雙節細胞,約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系,負責聯絡作用。第三層叫節細胞層,專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構,它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面,經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區,其分辨能力強。視網膜色素上皮(RPE)位于脈絡膜和光感受器細胞外節之間,是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養物質和代謝終產物轉運通道;主要是由單層色素上皮細胞所構成,排列十分規則。視網膜色素上皮參與循環,吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興奮性,并分泌多種生長因子,幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。細胞呈多角形,細胞分為三部分,即頂部、體部和基底部。視網膜色素上皮細胞無再生能力,細胞死亡后不被替換,而是鄰近的細胞向側面滑動,以填補死亡細胞遺留下來的空間。視網膜色素上皮位于脈絡膜和光感受器細胞外節之間,是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養物質和代謝終產物轉運通道。視網膜色素上皮參與循環,吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興奮性,并分泌多種生長因子,幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用胰dan白-膠原混合消化法結合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的經PCK免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細胞形態  上皮細胞樣

傳代特性  可傳1-2代

消化液  0.25%胰dan白

培養條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基,90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

實驗報告:

一、分離與培養:

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

 

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

HLA-DR抗體 內臟異位相關蛋白/鋅指蛋白203封閉多肽 

磷化細胞核因子/k基因結合核因子p100抗體 GTPIMAP家族成員1封閉多肽 

酪氨蛋白激B3抗體 叉頭蛋白F2封閉多肽 

γ-谷氨酰轉肽2重鏈抗體 磷化促凋亡Bik蛋白封閉多肽 

鋅指蛋白321B抗體 精子成熟相關蛋白BOULE封閉多肽 

組織相容性復合體蛋白2反式激活因子抗體 胞漿蘋果1封閉多肽 

整合β6/Integrin β6抗體 染色體相關蛋白2封閉多肽 

線粒體鐵轉運蛋白2抗體 絲氨/蘇氨蛋白激Nek11封閉多肽 

成纖維細胞生長因子17抗體 FITM2蛋白封閉多肽 

DZANK1蛋白抗體 Kelch樣蛋白17封閉多肽 

G蛋白偶聯受體激6抗體 波形蛋白封閉多肽 

BEND4蛋白抗體 4號染色體開放閱讀框3封閉多肽 

鋅指脂蛋白-1b抗體 COPS9蛋白封閉多肽 

羥磺基轉移2抗體 異質核糖核蛋白H封閉多肽 

血小板反應蛋白2/敏感蛋白2抗體 KIAA0701蛋白封閉多肽 

磷化蛋白酪氨激JAK-3抗體 磷化γ氨基丁γ2受體封閉多肽 

自主生長因子GFI1抗體 視網膜色上皮細胞特異性蛋白65封閉多肽 

嗅覺受體5L2抗體 神經突觸13封閉多肽 
大鼠視網膜色素上皮細胞人卵巢成纖維細胞5×10?Cells/T25培養瓶

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