產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 組織來源 |
人結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 結(jié)腸組織 |
商品詳細(xì)介紹:
4.細(xì)胞簡介:
分離自結(jié)腸組織;結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,大部分固定于腹后壁,結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為:黏膜(上皮層、固有層、黏膜肌層),黏膜下層(疏松結(jié)締組織),肌層(內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑肌),外膜(纖維膜或漿膜)。腸黏膜上皮細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障,持續(xù)暴露于大量抗原中,也是機(jī)體面對病原微生物的第一道防線。因此,腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運(yùn)等重要生理功能之外,在黏膜先天性和獲得性免疫防御機(jī)制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞,在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強(qiáng)度。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)方法,為研究腸黏膜上皮細(xì)胞以及與腸黏膜相關(guān)疾病建立合適的細(xì)胞模型。
5.方法簡介:
實驗室分離的采用先機(jī)械分離法、后膠原消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
實驗室分離的經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰dan白
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): | 二、免疫熒光鑒定: |
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
| 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
載脂蛋白A1抗體 附睪分泌蛋白4封閉多肽 人髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)ELISA試劑盒
腫瘤抑制基因P53蛋白抗體 鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白8封閉多肽 人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP antibody)試劑盒ELISA
缺氧誘導(dǎo)因子1α抑制蛋白/HIF1AN單克隆抗體 胱硫醚γ裂解封閉多肽 人髓鞘蛋白P0(MPZ)ELISA檢測試劑盒
CLEC2D蛋白抗體 巖藻糖轉(zhuǎn)移8封閉多肽 人髓磷脂P2蛋白(PMP2)ELISA試劑盒
英文名稱: ARP3 BCL7B蛋白封閉多肽 人髓過氧化物特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)試劑盒ELISA
Smad蛋白相互作用蛋白1抗體 精氨酰tRNA合成封閉多肽 人性鐵蛋白(AIF)檢測試劑盒elisa
核纖層蛋白A抗體 NLRP14蛋白封閉多肽 人性富亮氨核磷蛋白32家族成員E(ANP32E)ELISA試劑盒
外胚層發(fā)育不良蛋白抗體 腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換封閉多肽 人性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF/FGF-1)試劑盒ELISA
英文名稱: phospho-ATF2 (Thr71) 磷化上皮鈣粘附分子封閉多肽 人四氫生物蝶呤(BH4)ELISA檢測試劑盒
HOXA10抗體 過氧化物體膜蛋白4封閉多肽 人四連接(CLEC3B)ELISA試劑盒
英文名稱: CD38 鞘磷脂沉積病C1樣蛋白1封閉多肽 人死亡相關(guān)蛋白1(DAP/DAP1)試劑盒ELISA
神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白13抗體 6號染色體開放閱讀框168封閉多肽 人絲蟲病抗體(IgG4)檢測試劑盒elisa
腺苷單磷活化蛋白激α1/AMPK α 1抗體 磷化胰島受體底物-1封閉多肽 人絲氨肽抑制劑,Kazal 1型(SPINK1)ELISA試劑盒
白介7抗體 富含脯氨蛋白25封閉多肽 人絲氨肽2甘露聚糖結(jié)合凝集(MASP2)試劑盒ELISA
水通道蛋白4抗體 麻疹病毒血凝封閉多肽 人絲氨HTRA1(HTRA1)ELISA檢測試劑盒
葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78/熱休克蛋白70蛋白5抗體 神經(jīng)誘導(dǎo)胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Churchill封閉多肽 人絲氨/蘇氨激24(STK24)ELISA試劑盒
英文名稱: phospho-JAK2 (Tyr1007+Tyr1008) 轉(zhuǎn)導(dǎo)β1X連鎖蛋白封閉多肽 人絲氨/蘇氨蛋白激PAK4(PAK4)試劑盒ELISA
FAM55C蛋白抗體 白細(xì)胞介27封閉多肽 人絲氨/蘇氨蛋白激B-raf(BRAF)檢測試劑盒elisa
人結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞TJ905人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TJ905細(xì)胞專用培養(yǎng)基500ML
TOV-112D人上皮性卵巢癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TOV-112D細(xì)胞專用培養(yǎng)基125ML
TOV-112D人上皮性卵巢癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TOV-112D細(xì)胞專用培養(yǎng)基500ML
TPC-1人乳頭狀甲狀腺癌株細(xì)胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TPC-1細(xì)胞專用培養(yǎng)基125ML
TPC-1人乳頭狀甲狀腺癌株細(xì)胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TPC-1細(xì)胞專用培養(yǎng)基500ML
TT人甲狀腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TT細(xì)胞專用培養(yǎng)基125ML
TT人甲狀腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TT細(xì)胞專用培養(yǎng)基500ML