詳細介紹
細胞名稱 人B淋巴細胞瘤細胞;RAMOS(RA.1)圖片
形態特性 淋巴母細胞樣;圓形
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞來源于母系Ramos;EBV陰性;表達IL-4受體和低親和性IgE受體(CD23);每個細胞表面大約有1500個IL-4的結合位點;分泌IgM(lamda L);表達膜型和分泌型的免疫球蛋白。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代;3~5天1次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10,11;D13S317:13,14;D16S539:10,13;D18S51:15;D6S1043:13,15;D21S11:30;D2S1338:20,23;D3S1358:14,15;D5S818:7,12;D7S820:11;D8S1179:13,16;FGA:20,24;Penta E:21;vWA:15,16;
同工酶
染色體
使用權限 A類
人B淋巴細胞瘤細胞;RAMOS(RA.1)圖片操作流程:
※主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡),co2孵箱。
※細胞的復蘇培養傳代及凍存:
?細胞的復蘇培養:從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化,然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
?細胞傳代:原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
?細胞形態的觀察:在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
?生長曲線:取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
?細胞的貼壁率:指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
?細胞的計數:常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
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