培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
本試劑盒是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中caspase 4酶活性或純化的caspase 4酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測(cè)或容量不超過(guò)100μl的分光光度檢測(cè)杯檢測(cè)時(shí),除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可以檢測(cè)20個(gè)樣品。 Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 4有時(shí)被寫作caspase-4或caspase 4,可以和Apaf-1相互作用并參與細(xì)胞色素導(dǎo)致的caspase 3激活。Caspase 4也可以和caspase 14相互作用。 本Caspase 4活性檢測(cè)試劑盒是基于caspase 4可以催化底物Ac-LEVD-pNA(acetyl-Leu-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)caspase 4的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。 試劑盒中提供了caspase 4催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,可以作為定量caspase 4酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。 |
試劑盒組分:
裂解液——————8ml
檢測(cè)緩沖液——————8ml
Ac-LEVD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
儲(chǔ)存條件:-20℃。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
通道蛋白0(AQP-0)elisa試劑盒英文名稱:AQP-0 ELISA Kit早老素穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌酶組件蛋白APH1抗體包裝1g
雙氫睪酮(DHT)elisa試劑盒英文名稱:DHT ELISA Kit磷酸化蛋白激酶AKT1抗體包裝25g
瘦素(Leptin)elisa試劑盒英文名稱:Leptin ELISA Kit磷酸化蛋白激酶AKT1抗體包裝5g
瘦素(LEP)elisa試劑盒英文名稱:LEP ELISA KitASH1L蛋白抗體包裝1g
嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)elisa試劑盒英文名稱:ECP ELISA Kitα2C-AR腎上腺素能受體抗體包裝100g
嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶(EPO)elisa試劑盒英文名稱:EPO ELISA Kit中心體蛋白AZI1抗體包裝25g
嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)elisa試劑盒英文名稱:ECF ELISA Kitα蛋白激酶3抗體(心肌)包裝5g
嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 3(Eotaxin 3)elisa試劑盒英文名稱:Eotaxin 3 ELISA Kit表皮型脂氧合酶3抗體(魚鱗病相關(guān)蛋白)包裝1g
嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)elisa試劑盒英文名稱:Eotaxin 2/CCL24 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域28抗體包裝250mg
嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)elisa試劑盒英文名稱:Eotaxin 1/CCL11 ELISA Kit淋巴相關(guān)AF4樣蛋白抗體包裝5g
嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)elisa試劑盒英文名稱:CyPA ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體包裝250g
視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)elisa試劑盒英文名稱:RBP-4 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13A抗體包裝500g
視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)elisa試劑盒英文名稱:RBP ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體包裝1G
生長(zhǎng)抑素(SS)elisa試劑盒英文名稱:SS ELISA Kit錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白1A抗體包裝250MG
生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)elisa試劑盒英文名稱:GHRP-Ghrelin ELISA Kit脂肪特定轉(zhuǎn)錄因子2抗體包裝1g
特異性錨樣蛋白1抗體血小板因子4(PF4)Otenabant 是一種有效的,選擇性的 cannabinoid receptor CB1 拮抗劑,Ki 值為 0.7 nM,對(duì)其選擇性是對(duì) CB2 的 10
Caspase 4 活性檢測(cè)試劑盒植物血球凝集素PHA-M
其他植物血凝素
英文名稱:Phytohemagglutinin PHA-M
其他英文名稱:Lectin from Phaseolus vulgaris (red kidney bean)
產(chǎn)品規(guī)格:BR,60-80%
包裝:100毫克
CAS號(hào):9008-97-3
級(jí)別:BR
效價(jià):<40 μg per mL agglutination activity
蛋白含量:60~80% biuret
產(chǎn)品描述:Agglutination activity is expressed in μg/mL and is determined from serial dilutions of a 1 mg/mL solution. This activity is the lowest concentration to agglutinate a 2% suspension of human erythrocytes in phosphate buffered saline, pH 6.8, after 1 hr incubation at 25 °C
性狀:粉末
用途:生化研究。用于細(xì)胞體外培養(yǎng);用于細(xì)胞功能及染色體的研究等。
保存:2~8°C