操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)
英文名稱:Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20次|50次
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒提供了一種高靈敏度又快速簡便的細(xì)胞凋亡檢測方法。對(duì)于待檢測的細(xì)胞或組織樣品,經(jīng)過生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟,即可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。本試劑盒足夠檢測20個(gè)樣品。 |
試劑盒組分:
TdT酶———————————40μl
Biotin-dUTP————————960μl
TdT酶稀釋液(選用)—————500μl
Streptavidin-HRP——————22μl
Streptavidin-HRP稀釋液———1ml
DAB顯色液A————————6ml
DAB顯色液B————————6ml
標(biāo)記反應(yīng)終止液——————6ml
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時(shí),暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP),隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin(Streptavidin-HRP)結(jié)合,最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞,從而可以通過普通光學(xué)顯微鏡檢測到凋亡的細(xì)胞,這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細(xì)胞凋亡的原理。
本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn):
(1)高靈敏度:背景染色極低,陽性染色強(qiáng),可以在單細(xì)胞水平檢測到細(xì)胞凋亡,同時(shí)由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細(xì)胞凋亡。
(2)特異性好:TUNEL檢測時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞,而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。
(3)快速:僅需約2-3個(gè)小時(shí)即可完成。
(4)應(yīng)用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。
TUNEL法特異性檢測細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂,但不會(huì)檢測出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開,另一方面也不會(huì)把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。
極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒有DNA斷裂,此時(shí)不適用TUNEL法檢測。在個(gè)別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下,最好同時(shí)檢測多個(gè)凋亡指標(biāo)。
儲(chǔ)存條件:-20℃。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)elisa試劑盒英文名稱:MAP1LC3B ELISA Kit磷酸化β抑制蛋白1抗體包裝1g
微管蛋白β3(TUBB3)elisa試劑盒英文名稱:TUBB3 ELISA Kit磷酸化有絲分裂激酶A抗體包裝25g
網(wǎng)膜素(omentin)elisa試劑盒英文名稱:omentin ELISA Kit磷酸化APS抗體包裝5g
晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)elisa試劑盒英文名稱:AGEs ELISA Kit有絲分裂激酶A抗體包裝1g
脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)elisa試劑盒英文名稱:DPD ELISA Kit干擾素誘導(dǎo)蛋白AIM2抗體包裝25g
脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)elisa試劑盒英文名稱:DPD ELISA Kit通道蛋白-2抗體包裝5g
脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)elisa試劑盒英文名稱:DHEA-S ELISA Kit腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結(jié)合蛋白抗體包裝25ml
脫氫表雄酮S7(DHEA-S7)elisa試劑盒英文名稱:DHEA-S7 ELISA KitADP核糖基化因子樣11抗體包裝5ml
脫氫表雄酮(DHEA)elisa試劑盒英文名稱:DHEA ELISA KitARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體包裝1g
褪黑素(MT)elisa試劑盒英文名稱:MT ELISA KitARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體包裝5g
突觸融合蛋白2(STX2)elisa試劑盒英文名稱:STX2 ELISA KitARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體包裝25g
突觸融合蛋白1A(STX1A)elisa試劑盒英文名稱:STX1A ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白10抗體包裝25g
透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)elisa試劑盒英文名稱:HABP ELISA Kit酰基結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體包裝5g
透明質(zhì)酸(HA)elisa試劑盒英文名稱:HA ELISA Kit氨基酰化酶1抗體包裝25g
銅藍(lán)蛋白(CP/CER)elisa試劑盒英文名稱:CP/CER ELISA Kit脂肪甘油三酯脂酶抗體包裝5g
脂聯(lián)素受體2抗體激肽釋放酶3(KLK3)Torin 2 是一種 mTOR 抑制劑,抑制內(nèi) mTOR 活性,EC50 為 0.25 nM,比作用于 PI3K (EC50: 200 nM) 選擇性高
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)中性氧化鋁
其他 層析氧化鋁;α-氧化鋁,三氧化鋁
英文名稱: Alumina
其他英文名稱: Aluminum oxide
產(chǎn)品規(guī)格: FCP,100-200目
包裝:500克
產(chǎn)品規(guī)格: FCP,200-300目
包裝:500克
CAS號(hào):1344-28-1
Al2O3=101.96
級(jí)別:FCP
目數(shù):100-200目
pH(100g/L,25℃):6.5~7.5
活度:合格
水溶解物:≤0.5%
灼燒失量:≤8.0%
干燥失量:≤1.0%
顆粒度:≥75.0%
目數(shù):200-300目
顆粒度:≥70.0%
性狀:粉末。含有硫酸鈣粘合劑。緩慢地部分溶于堿性水溶液,幾乎不溶于水。
用途:生化研究。薄層色譜吸附劑
保存:RT