操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:膠原酶IV型
英文名稱:Collagenase IV
產(chǎn)品規(guī)格:100mg
發(fā)貨周期:1~3天
本品為IV型膠原酶,≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units),特別適用于胰島組織的消化。
本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種酶粗提物,不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶,多糖酶,脂酶等,分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì),使得本品非常適用于組織消化。
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膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,一種肽鏈內(nèi)切酶,能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。
目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,分為四種類型:膠原酶I型,II型,III型和IV型,在應(yīng)用上有所偏向:
1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備;
2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備;
3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,常用于乳腺細(xì)胞的制備;
4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰島細(xì)胞的制備,或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。
酶活力單位定義
在37℃,pH7.5 的條件下,5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1μM L-亮氨酸的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。
儲存條件:4℃避光,有效期兩年
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
嗎啉惡(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Caffeic acid磷化巨噬集落激因子受體抗體包裝5g
嗎貝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Caffeic acid微管結(jié)合蛋白CYLD抗體包裝100g
嗎替麥考酚酯/霉酚酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Caffeic acid磷化微管結(jié)合蛋白CYLD抗體包裝25g
麥白霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neomycin sulfate磷化CBX5抗體包裝5g
麥迪霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neomycin sulfate霉抗體包裝100mg
麥芽三糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diphenhydramine hydrochloride磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
麥芽糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diphenhydramine hydrochloride磷化質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體包裝500mg
沒食子乙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Polyinosinic acid磷化周期依賴激2抗體包裝100g
霉酚; 麥考酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mildronate,Meldonium磷化分裂周期蛋白25C抗體包裝25g
美(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mildronate,Meldonium磷化周期依賴性激2抗體包裝5g
美羅培南(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Carrageenan質(zhì)膜微囊蛋白-3抗體包裝25g
美洛西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pranlukast3號染色體開放閱讀框34抗體包裝5g
美洛昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Metoprolol tartrateCD134抗體包裝1g
美索巴莫(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Metoprolol tartrate單核趨化蛋白5抗體包裝5g
美他多辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Arabic gum髓鞘相關(guān)糖蛋白CD57抗體包裝100g
優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品色C-1試劑盒甜菊糖;Stevioside
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR色b561試劑盒特女貞苷;Specnuezhenide
假單胞菌屬Pseudomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品絨毛蛋白/埃茲蛋白試劑盒β-蛻皮激;Hydroxyecdyso
膠原酶IV型亞磷氫二鈉五水合物
其他 五水亞磷鈉
英文名稱: Sodium phosphite dibasic pentahydrate
其他英文名稱: di-Sodium hydrogen phosphite
產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%
包 裝: 250克/1公斤
CAS號:13517-23-2
Na2HPO3•5H2O=216.04
級別:AR
含量:≥98%
硫鹽:≤50ppm
鐵:≤10ppm
氯化物:≤50ppm
重金屬:≤0.001%
性狀:結(jié)晶粉末。
用途:生化研究。
保存:RT