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中文名稱：Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

產品規格：20次|50次

發貨周期：1～3天

試劑盒組份：

Annexin V-FITC——————100μl

Annexin V-FITC結合液———12ml

碘化丙啶染色液——————220μl

Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，參與細胞內的信號轉導。但僅Annexin V被報道可以調控一些PKC的活性。

Annexin V選擇性結合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷脂酰絲氨酸主要分布在細胞膜內側，即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側。磷脂酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷脂酰絲氨酸結合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。

用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標記的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。

本試劑盒還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經喪失，Annexin V-FITC可以進入到細胞漿內，與位于細胞膜內側的磷脂酰絲氨酸結合，從而也使壞死細胞呈現綠色熒光。

本試劑盒的流式檢測效果參考圖1和圖2，熒光顯微鏡檢測效果參考圖3。

1.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測細胞凋亡的效果圖。Jurkat細胞未經處理(A)或用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時(B)后，用本試劑盒染色，然后用流式細胞儀進行細胞的散射和熒光檢測。從圖中可以看出，經過凋亡誘導劑喜樹堿處理后的細胞，其Annexin V-FITC染色陽性并且PI染色陰性的細胞，即凋亡細胞，明顯增加(B圖的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色雙陽性的細胞，即壞死細胞，也有所增加(B圖的右上象限)。圖中Annexin V-FITC染色陰性PI染色陽性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B圖的左上象限)出現的細胞點是許可范圍內的檢測誤差。實測數據可能會因細胞類型、細胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。

2.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測效果驗證圖。Jurkat細胞用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時后，未經染色(A)、僅用本試劑盒中的PI進行染色(B)、僅用本試劑盒中的Annexin V-FITC進行染色(C)、用本試劑盒中的Annexin V-FITC和PI進行雙染(D)。從圖中可以看出，未經染色的是雙陰性細胞(A)，僅PI染色后出現了預期的PI染色陽性的細胞，僅Annexin V-FITC染色出現了預期的Annexin V-FITC染色陽性的細胞，Annexin V-FITC和PI雙染出現了預期的僅Annexin V-FITC染色陽性的凋亡細胞和雙陽性的壞死細胞。出現的非預期的細胞點*在許可的誤差范圍內。實測數據可能會因細胞類型、細胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。

儲存條件：4℃避光，有效期6個月。
注意事項：

1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

操作規程：

1、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～0μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。

5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)

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血管內皮細胞生長因子B(VEGF-B)elisa試劑盒英文名稱：VEGF-B ELISA Kit胎蛋白單克隆抗體(檢測)包裝1g

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粘附分子IgG樣結構域蛋白2抗體白介素4(IL4)KU-55933 (ATM Kinase Inhibitor) is a potent and specific ATM inhibitor with IC50
Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒轉移核糖核酸（酵母）

其他9014-25-9

英文名稱：t-RNA

其他英文名稱：t-Ribonucleic acid(yeast)；Transfer RNA；Ribonucleic acid transfer from baker's yeast

產品規格：BR，15～20A260單位/mg

包　　裝： 100毫克

CAS號：9014-25-9

級別：BR

含量：15～20A260單位/mg

電泳試驗：合格

性狀：灰色至灰褐色粉末

用途：生化研究。蛋白質生物合成中特異地轉運氨基酸，并保證遺傳信息從核酸到蛋白質準確傳遞的一類小分子核糖核酸。每種氨基酸有一種以上相應的tRNA，每個細胞約有40～70種不同的tRNA，分別由72～93個核苷酸組成，其中5％～20％為稀有堿基，相對分子量平均：為25 000，沉降系數4S。不同tRNA的一級結構不同，但有共同的三葉草二級結構特征。其中氨基酸臂上3′端-C-C-A-OH是結合氨基酸的位點，氨基酸的?；谔禺惖陌被RNA合成酶催化下附著于相應tRNA3′端腺苷的3′羥基上；反密碼環中三個連續的核苷酸構成反密碼子與核糖體上mRNA的密碼子互補結合，使氨基酸準確對號入座合成多肽鏈。通過這種密碼-反密碼-氨基酸之間的對應關系，保證了核酸到蛋白質的信息準確傳遞。tRNA起了重要的接合(adaptor)作用

保存：2～8℃