商品介紹:
在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進(jìn)行熒光素FITC 標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin V 作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 |
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細(xì)胞膜,但對(duì)凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,PI 能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。
本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測(cè)(不推薦用于檢測(cè)組織樣本)。
產(chǎn)品屬于:
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
降鈣素原(PCT)elisa試劑盒英文名稱:PCT ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體包裝250mg
降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)elisa試劑盒英文名稱:CGRP ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體包裝1g
降鈣素(CT)elisa試劑盒英文名稱:CT ELISA Kit轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體包裝25g
堿性磷酸酶(ALP)elisa試劑盒英文名稱:ALP ELISA Kit卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體包裝5g
堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF/FGF2)elisa試劑盒英文名稱:bFGF/FGF2 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體包裝1g
堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)elisa試劑盒英文名稱:bFGF ELISA Kit載脂蛋白C3抗體包裝5g
狀腺素抗體(TAb)elisa試劑盒英文名稱:TAb ELISA Kit凋亡增強(qiáng)核酸酶抗體包裝1g
狀腺素(T4)elisa試劑盒英文名稱:T4 ELISA Kit染色體脆弱性相關(guān)基因抗體包裝1g
狀腺球蛋白(TG)elisa試劑盒英文名稱:TG ELISA Kit磷酸化蛋白激酶B抗體包裝25g
狀腺過氧化物酶(TPO)elisa試劑盒英文名稱:TPO ELISA Kit銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體包裝5g
狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)elisa試劑盒英文名稱:PTHrP ELISA Kit酰基合成酶家族4抗體包裝1g
狀旁腺激素(PTH)elisa試劑盒英文名稱:PTH ELISA Kit酸性磷酸酶樣蛋白2抗體包裝25g
種胎兒球蛋白/胎蛋白(AFP)elisa試劑盒英文名稱:AFP ELISA KitAHNAK核蛋白2抗體包裝5g
基化酶(Methylase)elisa試劑盒英文名稱:Methylase ELISA Kit二磷酸腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗體包裝1g
己糖激酶(HK)elisa試劑盒英文名稱:HK ELISA Kitp53誘導(dǎo)蛋白5抗體包裝250mg
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體催乳素(PRL)Amlodipine苯磺酸鹽是長(zhǎng)效鈣離子通道抑制劑。
Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒蔗糖酶
其他果糖苷酶;轉(zhuǎn)化酶;蔗糖轉(zhuǎn)化酶
英文名稱:Invertase from baker's yeast (S. cerevisiae)
其他英文名稱:β-D-Fructofuranosidase; β-D-Fructofuranoside fructohydrolase;Saccharase
產(chǎn)品規(guī)格:BR,200u/mg
包裝:250毫克/1克
CAS號(hào):9001-57-4
級(jí)別:BR
活力:≥200units/mg
活力定義:One unit will hydrolyze 1.0 μmole of sucrose to invert sugar per min at pH 4.5 at 55°C
PH:4.0~5.5
PH:4.5
性狀:類褐色粉末
用途:生化研究
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