培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase-5活性測(cè)定試劑盒 | Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于測(cè)定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-5活性。試劑盒測(cè)定原理基于Caspase-5特異水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA),釋放出游離的硝基pNA,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測(cè)定,吸光度值對(duì)應(yīng)于Caspase-5的水解活性。 |
細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡,可見于各種器官和細(xì)胞,在正常發(fā)育、生理、病理過(guò)程中對(duì)細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的蛋白酶家族,包含10多個(gè)成員。Caspase-5分子量47.7kD,與ICE有51%的同源性,在過(guò)量表達(dá)時(shí)可誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。
所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。
工作波長(zhǎng):大吸收波長(zhǎng)405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
谷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1H-Benzotriazole因子受體樣因子1抗體包裝500g
谷維(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dihydrochloride半胱亞磺脫羧抗體包裝1g
呱西替柳(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dihydrochloride型肝炎NS2反式調(diào)節(jié)蛋白/衰老相關(guān)的基因10蛋白抗體包裝25g
呱西替柳雜質(zhì)A(楊愈創(chuàng)木酚酯)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dimesilate固酮合成CYP11B2抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: INSULIN分裂周期蛋白8抗體包裝1g
桂美(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth oxide 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體包裝1g
果糖二磷鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Chloro-1,3-propanediol分裂周期蛋白16抗體包裝5g
哈西奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bisoprolol fumarate有絲分裂著絲粒蛋白F抗體包裝5g
核黃磷鈉混合物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bromhexine HCl9號(hào)染色體開放閱讀框115抗體包裝25g
紅霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bupivacaine HClCTDSPL蛋白抗體包裝5g
胡椒乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bupivacaine HClCTDSPL2蛋白抗體包裝1g
琥珀;丁二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Butenafine HCl乙酰酯相關(guān)蛋白抗體包裝1g
琥珀多西拉敏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Captopril卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體包裝250mg
琥珀潑尼龍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Captopril二氫嘧啶相關(guān)蛋白5抗體包裝5g
琥珀普卡必利英文名稱: (S)-Carbidopa磷化二氫嘧啶樣2抗體包裝1g
: NRS-1000ATCC43897DSM3037資源名稱: 強(qiáng)壯類芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP2007,EP5.心肌營(yíng)養(yǎng)1試劑盒維生A;Vitamin A
微小鏈霉菌Streptomyces│parvulus 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%心肌特異性肌鈣蛋白T試劑盒烏頭原堿;Aconine
多頭節(jié)叢孢Arthrobotrys│polycephala 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒烏美司;Ubenimex
Caspase-5活性測(cè)定試劑盒鹽吉西他濱
其他吉西他賓鹽鹽;4-基-1-(3,3-二氟-4-羥基-5-羥甲基四氫呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮鹽鹽;吉西他濱鹽鹽;鹽吉西他賓
英文名稱:LY-188011
其他英文名稱:dFdC;dFdCyd;Gemcitabine hydrochloride;2′-Deoxy-2′,2′-difluorocytidine;Gemzar (Lilly)
產(chǎn)品規(guī)格:BR
包裝:250毫克/1克/5克
CAS號(hào):122111-03-9
C9H11F2N3O4•HCl=299.66
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%(HPLC)
性狀:粉末或塊狀物
用途:生化研究。
用途:生化研究。
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