詳細介紹
培養操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細胞caspase-1活性。測定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-YVAD-pNA),釋放出游離的硝基pNA,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應于Caspase-1的水解活性。 |
細胞凋亡屬于程序化細胞死亡,可見于各種器官和細胞,在正常發育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩態具有十分重要的調節作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。其中Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產生20kD和10kD片斷,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調節細胞凋亡,并通過對細胞因子前體的剪切來調控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。
運輸及保存:試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內穩定。
所需儀器:酶標儀與96孔酶標板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。
工作波長:大吸收波長405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內測定,但靈敏度略降。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
蝶呤(標準品)英文名稱: Fluoxetine Hydrochloride8號染色體開放閱讀框4抗體包裝100g
蝶呤二鈉鹽 (標準品)英文名稱: Fluvoxamine maleateCD73抗體包裝25g
磺丁脲(標準品)英文名稱: Fluvoxamine maleate軸突相關粘附分子抗體包裝500g
咪唑英文名稱: Formestane6型膠原蛋白α5抗體包裝1g
咪唑(標準品)英文名稱: Formestane神經粘附分子CALL抗體包裝5g
芬那(標準品)英文名稱: Fosinopril sodium中性粒殺菌蛋白BP30抗體包裝100ml
砜霉(標準品)英文名稱: Furosemide21號染色體開放閱讀框56抗體包裝500ml
鈷(標準品)英文名稱: FurosemideT淋巴CD1抗體包裝50ml
磺地平(標準品)英文名稱: Gemfibrozil角蛋白5抗體包裝100g
磺倍他司汀(標準品)英文名稱: Gemfibrozil補體C9a抗體包裝25g
磺達沙星(標準品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框141抗體包裝1g
磺多拉司瓊(標準品)英文名稱: Gliclazide20號染色體開放閱讀框160抗體包裝5g
磺多沙唑(標準品)英文名稱: Glyburide/Gliebenclamide親環蛋白(親環)40抗體包裝100g
磺酚妥拉明(標準品)英文名稱: Glyburide/GliebenclamideT調控相關蛋白抗體包裝25g
磺吉米沙星(標準品)英文名稱: Glimepiride突觸后蛋白CRIPT抗體包裝5g
白靈側耳(白靈菇)Pleurotus│nebrodensis 質量規格:HPLC>98%,標準品相撲結合UBC9試劑盒無檸檬;Citric acid
季也蒙畢赤酵母Pichia│guilliermondii 質量規格:干品純度≥90.0%,干品含量≥85.0%,USP34腺嘌呤核苷轉運蛋白試劑盒文多靈;Vindoline
pTargetFpTargetF 質量規格:含量測定腺苷脫試劑盒五味子;Schisandrin
Caspase-1活性測定試劑盒鹽環胞苷
其他鹽環胞啶;鹽環胞甙;安西他濱鹽鹽
英文名稱:Cyclo-C
其他英文名稱:Cyclocytidine HC1;Ancitabine hydrochloride;2,2'-Anhydro-1-beta-D-arabinofuranosylcytosine hydrochloride
產品規格:高純,98%
包 裝: 5克
CAS號:10212-25-6
C9H11N3O4•HCl=261.66
級別:High purity grade
含量:≥98.0%
氯化物:≤0.01%
硫鹽:≤0.01%
重金屬:≤10ppm
性狀:微黃色至黃褐色粉末,微溶于水,水溶液呈性,具旋光性,在260nm處有大吸收峰;主要由四種核糖核苷通過3′,5′-磷二酯鍵連接成單鏈大分子,單鏈大分子通過自身回折使堿基配對可形成雙螺旋結構,分子量大于104,主要有三種即核糖體核糖核(rRNA)信使核糖核(mRNA)和轉移核糖核(tRNA)。一種重要的生物大分子。易為強堿所降解,主要產生四種A、C、G、U 3′(2′)-核苷
用途:生化研究。核糖核的底物,也用于食品調味劑、核類及生化研究。與蛋白質生物合成有關,對DNA中遺傳信息的表達十分重要。RNA在DNA復制中還起引物作用,對于DNA所含遺傳信息的傳遞也是的
保存:2~8℃