人胃粘膜上皮細(xì)胞組織解離液冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱：人胃粘膜上皮細(xì)胞組織解離液
規(guī)格：3×1ml
細(xì)胞凍存步驟： 
   待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟：    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象
HDGF  肝癌衍生生長(zhǎng)因子抗體（高遷移率族蛋白1樣蛋白2抗體） 0.2ml
HOXB2  同源盒蛋白B2抗體 0.1ml
HOXB8  同源盒蛋白B8抗體 0.2ml
HSPA6  熱休克蛋白70家族蛋白6抗體 0.2ml
Id1  DNA結(jié)合抑制因子1抗體 0.2ml
LAPTM4B  溶酶體蛋白跨膜β4抗體 0.2ml
LDOC1/BCUR1  癌癥亮氨酸拉鏈下調(diào)因子1抗體 0.2ml
LOXL2  賴氨酰氧化酶相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
人胃粘膜上皮細(xì)胞組織解離液LRRN5  富含亮氨酸重復(fù)神經(jīng)元5抗體 0.2ml
Lipophilin B  親脂性蛋白B抗體 0.2ml
MAG1  肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
MARVELD1  候選腫瘤抑制基因MARVELD1抗體 0.2ml
MOBK1B/C2orf6  2號(hào)染色體開放閱讀框6抗體 0.2ml
MT1  成熟T淋巴細(xì)胞增殖蛋白1抗體 0.2ml
Mimitin  MYC誘導(dǎo)線粒體蛋白抗體 0.2ml
NANOGP8  干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體 0.2ml
NOL8  核仁蛋白8抗體 0.2ml
NUP88  核孔復(fù)合體蛋白88抗體 0.2ml
OCC1  結(jié)腸癌過度表達(dá)蛋白1抗體 0.2ml
OCIAD2  卵巢癌免疫反應(yīng)抗原抗體 0.2ml
OLFM4  凋亡蛋白OLFM44抗體 0.2ml
ORAV1  口腔癌高表達(dá)的蛋白1抗體 0.2ml
ORP4/OSBP2  氧化固醇結(jié)合蛋白4抗體 0.2ml
PAGE1  前列腺相關(guān)P抗原家族成員1抗體 0.2ml
PAI1/PLANH1/Serpine 1  內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活抑制蛋白1抗體 0.2ml
NMT1  豆蔻酰基轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml
GPR171/Platelet Activating Receptor H963  G蛋白偶聯(lián)受體171抗體 0.2ml
POT1  端粒保護(hù)蛋白1抗體 0.2ml
PRSS3  腦胰蛋白酶3抗體 0.2ml
HDBP2/PTTG1IP  乳頭瘤病毒調(diào)控因子1抗體（鋅指蛋白395） 0.2ml
PCANAP2/Prostein  前列腺癌相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
RLBP1L1  視黃醛結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
RING5  環(huán)指蛋白5抗體（E3泛素蛋白連接酶RNF5） 0.2ml
RPL15  核糖體蛋白L15抗體 0.2ml
RPL19  核糖體蛋白L19抗體 0.2ml
RPL5  核糖體蛋白L5抗體 0.2ml
RRBP1  核糖體結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
S100A7/Psoriasin  S100鈣結(jié)合蛋白A7抗體 0.2ml
RBBP6  視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白6抗體 0.2ml
S100PBP/S100P binding protein  S100P結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
SAMD14  SAMD14抗體 0.2ml
CDMP1/GDF5  軟骨衍生形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體 0.2ml
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2)  磷酸化RNA聚合酶II CTD抗體 0.1ml
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S5)  磷酸化RNA聚合酶II CTD抗體 0.1ml
RNASE4/Angiogenin  血管生成素核糖核酸酶4抗體(肌性側(cè)索硬化癥蛋白) 0.1ml

操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。