詳細介紹
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
詳細參考數值:
產品名稱:卵白蛋白ELISA檢測試劑盒
英文名稱:Egg albumin
檢測范圍:2.5mg/mL~80mg/mL
貨號:YS-E97118
性狀:盒狀液體。
實驗方法:競爭法、一步法、夾心法、高敏法等。
作用范圍:科學研究。
樣品形式:血清血漿細胞培養上清其它生物液體
保質期:6個月,本公司試劑盒系列產品均為**批次,請放心購買!
庫存信息: *√質量保證√庫存充足√
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
優點:
1、*抗體----高效、靈敏、特異
2、規范包被操作----吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、良好的優化方案----重復性高,可靠性強
4、購買本公司的ELISA試劑盒,免費代測
5、技術服務要求:專業,規范,高效
6、適用于體液、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等多種類型的樣本
7、可檢測動物類型豐富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黃金地鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、山羊、鵝、雞、蝦、河蟹、鱸魚、斑馬魚等
8、可檢測指標齊全:炎癥因子、血管生成素、動脈粥樣硬化因子、趨化因子、生長因子基質金屬蛋白酶、脂肪因子等等
9、經濟、實惠、可靠,完善、穩定的實驗體系,科研隊伍,良好的實驗設備、準確可靠的實驗結果,是您可靠的合作伙伴。
0.5mL 探針標記PCR Mix
50T 志賀氏菌熒光PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pCYB 2 pCYB 2 低溫運輸,-20℃保存
200 mL 大鼠白細胞分離液1.084 Cell Separation Solution -20℃保存
100U 膽固醇酯酶 Cholesterol Esterase -20℃保存
500mL Potassium Phosphate Solution,0.2M, pH7.0 Potassium Phosphate Solution,0.2M, pH7.0 常溫保存
1次 96孔板病毒DNAout(離心法) 96 Microwell Plate Viral DNAOUT 常溫
1瓶 PG-BE1細胞株 PG-BE1 低溫運輸和保存
50T 單增李斯特菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
1 管 JM105大腸桿菌 JM105 E.coli Strain -80℃保存
1瓶 Sp2/0-Ag14細胞株 Sp2/0-Ag14 低溫運輸和保存
2 ug pcDNA3.1/Myc-His (-)B pcDNA3.1/Myc-His (-)B 低溫運輸,-20℃保存
200mL 自誘導液體培養基(arab啟動子)
卵白蛋白ELISA檢測試劑盒1g D- 生物素 ( 維生素 H) D-Biotin 4℃保存
2 ug pET-21(+) pET-21(+) 低溫運輸,-20℃保存
1瓶 Eca-109(GFP)細胞株 Eca-109(GFP) 低溫運輸和保存
5次 DAB法生物素雜交試劑盒
50T 庚型肝炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pSP64 pSP64 低溫運輸,-20℃保存
100mL Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.5 Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.5 常溫保存
50T 人瘤病毒高危型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pCS2HA pCS2HA 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pG5lac pG5lac 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pRS41H pRS41H 低溫運輸,-20℃保存
25mL Orange-G Loading Dye (6X, Glycerol based) Orange-G Loading Dye (6X, Glycerol based) 常溫保存
50T 犬瘟熱病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存