試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。

商品屬性：

商品介紹：

公司產品僅用于科研測定意義
C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌類中，該酶催化肉桂酸羥化作用產生4-香豆酸鹽，是苯丙烷途徑中繼L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二個關鍵酶。

測定原理：

C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH，在340nm下測定NADPH生成速率，即可反映C4H活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到510 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

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