詳細介紹
細胞名稱 小耳豬肺細胞;SEP-L1培養
形態特性 成纖維細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一雌性小耳豬的皮膚組織。1988年由中國科學院昆明細胞庫建立。
培養條件 M-199:
with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 B類
小耳豬肺細胞;SEP-L1培養操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
Anti-Cyclin H/FITC 熒光素標記周期素H抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 熒光素標記白細胞免疫球蛋白樣受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Caspase 4/Caspase 11 半胱胺酸蛋白酶4/11抗體 規格 0.2ml
ELK1 細胞轉錄因子ELK1抗原 0.5mg
HCCS 英文名稱: 全細胞色素C合成酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Sin3b 轉錄抑制蛋白Sin3b抗體 規格 0.2ml
Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 熒光素標記白細胞免疫球蛋白樣受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Ki-67 Anti-gen Ki-67 Antigen(抗原)Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Anti-CD122/IL-2RB 白介素2受體β鏈抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PAK4 小鼠抗p21激活激酶4抗體 規格 0.2ml
PCSK9 Kit Rat 大鼠 PCSK9 ELISA配對抗體 ELISA
TMEM132A 英文名稱: 跨膜蛋白132A抗體 0.2ml
CNTNAP3 英文名稱: 接觸蛋白相關蛋白3抗體 0.1ml
Anti-CD122/IL-2RB 白介素2受體β鏈抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rabbit Anti-Mink IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗水貂IgG 0.1ml
GADL1 英文名稱: 谷酸脫羧酶樣蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ARHGAP20 Rho GTP酶激活蛋白20抗體 規格 0.2ml
Anti-IKB alpha(phospho S32 + S36)/FITC 熒光素標記磷酸化KB抑制蛋白α抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/RBITC 羅丹明標記的兔抗水貂IgG 規格 0.1ml
Anti-Phospho-PLK1 (Thr210)/FITC 熒光素標記磷酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-CYP8A1/PTGIS/FITC 熒光素標記前列環素合成酶抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-HRH3/GPCR97/FITC 熒光素標記組織胺H3受體抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CARPX/CA10 碳酸酐酶相關蛋白抗體(腦蛋白15) 規格 0.1ml
E2F6 轉錄因子E2F-6抗原 0.5mg
HEMK2 英文名稱: Hemk甲基轉移酶家族2號蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Shrimp tropomyosin 南美白對蝦過敏原蛋白(蝦原肌球蛋白)抗體 規格 0.1ml
Anti-HRH3/GPCR97/FITC 熒光素標記組織胺H3受體抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml