詳細介紹
產品名稱:人滑膜細胞生長因子
規格:1ml(500X)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus im
t-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-MMP-2/FITC 熒光素標記基質金屬蛋白酶-2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-Trop-2/gp50/Tpm2 /FITC 熒光素標記原肌球蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABCA1/ABC1 腺苷三磷酸結合盒轉運體A1抗體 規格 0.1ml
Mouse Anti-Guinea pig IgG/Bio 生物素標記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml
GPR65 英文名稱: G蛋白偶聯受體65抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rab11 ras癌基因家族Rab11蛋白抗體 規格 0.1ml
Anti-Trop-2/gp50/Tpm2 /FITC 熒光素標記原肌球蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Mcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓樣細胞白血病-1抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Anti-phospho-AMPK beta 1(Ser182) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-B-Raf (Ser444) 磷酸化B-Raf抗體 規格 0.1ml
Tris- HCl-TWEEN 20緩沖液 100ml 0.5mol/L pH7.6
VEGF-B 英文名稱: 血管內皮生長因子B抗體 0.1ml
DUOX2 英文名稱: 雙氧化酶2/甲狀腺氧化酶2抗體 0.2ml
Anti-phospho-AMPK beta 1(Ser182) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rabbit IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記兔IgG(細胞流式同型對照) 0.1ml
lysozyme 英文名稱: 溶菌酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh DACH1 細胞命運決定因子DACH1抗體 規格 0.2ml
TXB2 (Rabbit Thromboxane B2) ELISA Kit 兔血栓素B2Multi-class antibodies規格: 96T
Rhesus antibody Rh ZNF693/CASZ1 鋅指蛋白693抗體 規格 0.2ml
Anti-CYP450/FITC 熒光素標記細胞色素P450單氧化酶抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
CYT Ab(Human Cysticercosis antybody) ELISA Kit 人囊蟲病抗體Multi-class antibodies規格: 48T
人滑膜細胞生長因子Anti-Ki-67 (Proliferation Marker) Ki-67單克隆抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh LATS1 抑制基因LATS1抗體 規格 0.2ml
DHEA-S7(Human Dehydroepiandrosterone S7) ELISA Kit 人脫氫表雄酮S7 96T
PRRSV M protein 英文名稱: 豬藍耳病病毒M蛋白抗體 1ml
CCDC158 英文名稱: 卷曲螺旋結構域蛋白158抗體 0.2ml
Anti-Ki-67 (Proliferation Marker) Ki-67單克隆抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。