詳細介紹
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
細胞名稱 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1價格
形態特性 成纖維細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 3T3-L1是從3T3細胞(Swiss albino)中經克隆分離得到的連續傳代的亞系。該細胞從快速分裂到匯合和接觸性抑制狀態經歷了前脂肪細胞到脂肪樣細胞的轉變。該細胞鼠痘病毒陰性;可產生甘油三酯,高濃度血清可增強細胞內脂肪堆積。
培養條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
傳代方法 1:
3傳代;3-4天一次
傳代情況
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-p-NFATc2/FITC 熒光素標記磷酸化NFATc2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-Visfatin-2(CT)/FITC 熒光素標記內脂素/內臟脂肪素(C端抗體)IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體 anti-ARIP2B 0.2ml
Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的羊抗人IgM 0.1ml
GPR110 protein 英文名稱: G蛋白偶聯受體GPR110蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh presenilin 1/PS-1 (CT) 早老素蛋白-1抗體 規格 0.1ml
Anti-Visfatin-2(CT)/FITC 熒光素標記內脂素/內臟脂肪素(C端抗體)IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
mIgA(Human membrane IgA) ELISA Kit 人表面膜免疫球蛋白AMulti-class antibodies規格: 48T
Anti-phospho-c-Raf (Ser338) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HA tag(12CA5) HA tag標簽單克隆抗體 規格 0.1ml
ALT/GPT(Human Alanine Aminotransferase) ELISA Kit 人丙酸轉酶/谷丙轉酶 96T
protein C Activation peptide 英文名稱: 0.2ml
BTBD7 英文名稱: BTB/POZ結構域蛋白7抗體 0.2ml
Anti-phospho-c-Raf (Ser338) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
rec Protein G/HRP 辣根過氧化物酶標記的重組蛋白G 0.1ml
phospho-LATS1+LATS2 (Thr1079 +Thr1041) 英文名稱: 磷酸化抑制基因LATS1/LATS2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh DIAPH1 耳聾常染色體顯性遺傳相關蛋白1抗體 規格 0.2ml
Amylin(Mouse Amylin) ELISA Kit 小鼠胰淀素Multi-class antibodies規格: 48T
新霉素檢測試劑盒 96孔/盒 動物組織/水產/蜂蜜/奶
Anti-C-Met/HGFR /FITC 熒光素標記肝細胞生長因子受體(原癌基因蛋白)抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
C3bR(Human Complement fragment 3b rccptor) ELISA Kit 人補體片段3b受體Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-Phospho-Rad17 (Ser645) 磷酸化細胞周期檢控Rad17蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HARS 組氨酸tRNA連接酶抗體 規格 0.2ml
Cyclin-D3 ELISA Kit 大鼠細胞周期素D3 96T
phospho-p38 MAPK (Thr180 + Tyr182) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶p38抗體 0.1ml
BNIP3 英文名稱: 促凋亡調節蛋白BNIP3抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Rad17 (Ser645) 磷酸化細胞周期檢控Rad17蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml