詳細(xì)介紹
人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;Trex-293價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
細(xì)胞名稱(chēng) 人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;Trex-293價(jià)格
形態(tài)特性 上皮樣;多角
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞在293細(xì)胞的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改造,在含有滅瘟素的培養(yǎng)基中穩(wěn)定表達(dá)四環(huán)素阻遏,且重組腺病毒產(chǎn)率高于其他細(xì)胞的產(chǎn)率。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS + Blasticidin
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 PN5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線(xiàn) 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)
HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human 膀胱抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-2,4-D 2,4-二氯苯氧乙酸(除草劑)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Cortactin (Tyr466) 磷酸化皮層肌動(dòng)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
兔抗羊IgG-純化抗體 1mg/10mg 國(guó)產(chǎn)
CHI3L2 英文名稱(chēng): 軟骨細(xì)胞蛋白39抗體 0.2ml
DCAF13 英文名稱(chēng): DCAF13蛋白抗體 0.2ml
Anti-2,4-D 2,4-二氯苯氧乙酸(除草劑)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
vaspin(Mouse Visceral adipose-specific serine protease inhibitor) ELISA Kit 小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-cath-G/CG /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh eIF3A 真核翻譯起始因子3A抗體 規(guī)格 0.1ml
Nasoniavitripennis vilogenin,Vtg ELISA Kit 蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原 96T
MKLP1 英文名稱(chēng): 有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白樣1抗體 0.2ml
Phospho-Ack1 (Tyr284) 英文名稱(chēng): 磷酸化Ack1抗體 0.1ml
Anti-cath-G/CG /FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人谷胱甘肽過(guò)氧化物酶2(GPx-2)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠剪接因子3B亞基3(SF3B3)ELISA試劑盒,英文名:SF3B3 ELISA KiISA Kit for Human Heat shock protein beta-1小鼠蛋白激酶Bγ(PKBγ)ELISA試劑盒,英文名:PKBγ ELISA KiISA Kit for Human Involucrin小鼠WNT1誘導(dǎo)信號(hào)通道蛋白1(WISP1)ELISA試劑盒,英文名:WISP1 ELISA KiISA Kit for Human Kin of IRRE-like protein 1小鼠210kDa核孔蛋白(NUP210)ELISA試劑盒,英文名:NUP210 ELISA KiISA Kit for Human Laminin subunit alpha-5大鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA試劑盒,英文名:NOS ELISA KiISA Kit for Human Metallo-beta-lactamase domain-containing protein 1大鼠突觸蛋白1(Syn1)ELISA試劑盒,英文名:Syn1 ELISA KiISA Kit for Human Mucin-1大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒,英文名:Gelsolin ELISA Kit
ELISA Kit for Human Potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)ELISA試劑盒,英文名:BMPR1A ELISA KiISA Kit for Human Nuclear apoptosis-inducing factor 1大鼠解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA試劑盒,英文名:ADAM9 ELISA KiISA Kit for Human Prion-like protein doppel大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒,英文名:IP-10/CXCL10 ELISA KiISA Kit for Human Pyridoxal kinase大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒,英文名:LTB4 ELISA KiISA Kit for Human Proenkephalin-A大鼠CD19分子(CD19)ELISA試劑盒,英文名:CD19 ELISA KiISA Kit for S-Adenosyl methionine大鼠載脂蛋白F(APOF)ELISA試劑盒,英文名:APOF ELISA KiISA Kit for Human Selenium-binding protein 1大鼠鐵反應(yīng)元件結(jié)合蛋白2(IREB2)ELISA試劑盒,英文名:IREB2 ELISA Kit
山羊抗小鼠 IgG(H+L)/TRITC 0.1ml 紅色熒光,Jackson公司分裝
Phospho-Vimentin(Ser82) 英文名稱(chēng): 磷酸化波形蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Bad(Ser155) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 規(guī)格 0.1ml
MYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse MYOZ抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Dystrophin 英文名稱(chēng): 肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白抗體 0.1ml
Anti-Gamma-Adaptin 銜接蛋白γ抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CA ELISA Kit 大鼠兒茶酚胺Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-V.cholera Ogawa 01群稻葉型霍亂弧菌抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GAD67 谷氨酸脫羧酶-67抗體 規(guī)格 0.1ml
5-NT(Mouse 5-Nucleotidase) ELISA Kit 小鼠5核苷酸酶 96T
NESG1 英文名稱(chēng): 鼻咽上皮細(xì)胞特異性蛋白1抗體 0.1ml
phospho-ABCA1 (Ser2054) 英文名稱(chēng): 磷酸化腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體 0.1ml
Anti-V.cholera Ogawa 01群稻葉型霍亂弧菌抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml