詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA,但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點(diǎn)的克隆測序發(fā)現(xiàn),Ad5的1~4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2。該細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主。可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:10~1:20傳代,每2~3天換液1次。
傳代情況 P20
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:7,12;D13S317:12;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
2,2-二(2-四氫呋喃基)丙烷 (S)-1-N-叔丁氧羰基-3-羥基吡咯烷 六甲基環(huán)三硅氧烷
烯丙基*氧基硅烷 (R)-2-甲基-CBS (2-溴乙氧基)-特丁基二甲基硅烷
正十二烷基二甲基氯硅烷 碘代叔丁烷 異丙烯-2,3-二羥-1,4-雙二丙基膦丁烷
2-氯-2-氧-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷 三氟 烯丙氧基-叔丁基-二甲基硅烷
9-硼雙環(huán)[3.3.1]壬烷 二溴氟甲烷 1,6-二氯己烷
1,3-二碘丙烷 1,2-二溴四氟乙烷 1,3-二甲基金剛烷
4-苯硼酸頻哪吡咯烷 N-(2-氨乙基)-3-氨丙基三乙氧基硅烷 甲基苯基二氯硅烷
黑色素-1 1,5-二氨基戊烷 七氟-2-碘代丙烷
1-氯-3-苯基丙烷 1,2-二碘乙烷 2-(二苯基羥亞膦基)乙基三乙氧基硅烷
1-Boc-3-甲氨基吡咯烷 環(huán)硫乙烷 1,3,3-三乙氧基丙烷
1,2-雙*氧基硅基乙烷 全氟辛基碘烷 1-氯庚烷
3-甲基丙烯酰氧基丙基甲基二甲氧基硅烷 全氟碘代丁烷 乙烯基二甲基乙氧基硅烷
1,3-二噻烷 N,N-二甲氨基氯丙烷鹽酸鹽 1,3-雙(2,4-二氨基苯氧基)丙烷
(3,3,3-三氟丙基)二氯甲基硅烷 2-氨基-5-二乙基氨基戊烷 3-氨基戊烷
1,5-二氰基戊烷 氯甲基二甲基氯硅烷 馬來酸氯苯那敏
1-甲基-1-乙基溴化吡咯烷 二乙基(3-吡啶基 甲基乙烯基二甲氧基硅烷
三異丙基硅烷 1,1,2-*基丙基二甲基氯硅烷 乙基硼酸
1-氯-3-乙氧基丙烷 癸基二甲基氯硅烷 (R)-(+)-1-Boc-3-氨基吡咯烷
3-(Boc-氨基)吡咯烷 苯基二甲基氯硅烷 二甲氧基二甲基硅烷
白細(xì)胞裂解液
非凍型尿液DNA保存液
非凍型尿液DNA保存液
非凍型拭子DNA保存液(A型)
非凍型拭子DNA保存液(B型)
非凍型血液DNA保存液(100 mL)
非凍型血液DNA保存液(250 mL)
非凍型組織DNA保存液(100 mL)
紅細(xì)胞裂解液A型(核酸純化)
紅細(xì)胞裂解液B型(流式細(xì)胞分析用)
菌體內(nèi)毒素清除劑
土壤腐殖酸清除劑
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]培養(yǎng)一步離心式石蠟清除劑
動物DNA提取
96孔板血液DNAout(真空法)(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)
96孔板血液DNAout(離心法)(1次)
96孔板血液DNAout(離心法)(5次)
FTA血片DNAout(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)