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產品名稱：C918(眼脈絡黑色素瘤細胞)

規格：5×106cells

貨號：YS-02X9772

產品分類:細胞系

儲存條件2℃-8℃，避光儲存

運輸條件冰袋冷藏運輸

注意事項

1、使用產品時應注意無菌操作，避免污染。

2、本產品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3、為保持本產品的最佳使用效果，不宜將其長時間放置于室溫或較高的溫度環境中。

4、所有產品請于保質期內使用，超出保質期，必須放棄使用。

5、本產品只供進一步科研使用，不可應用于臨床等其他方面。

 

實驗材料：

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶

2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞

3、50ml離心筒2個

4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個

6、細胞計數板1塊；

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；

8、酒精燈1臺；

細胞復蘇步驟：

1：水浴鍋預熱至37℃備用

2：準備15mL離心管，并向其中加入適量培養基待用

3：將細胞凍存管從-80℃冰箱或液氮中取出，放入PE手套中，迅速投入水浴鍋

4：用力搖晃凍存管，使其在1分鐘內融化

5：用紙巾擦拭水漬，轉移至生物安全柜。用移液槍吸取細胞懸液，緩慢滴加到步驟2中準備好的離心管

6：1200rpm離心3分鐘

7：棄上清，用新鮮培養基重懸細胞，接種至新的無菌培養器皿中

PPLO肉湯 英文名稱：PPLO Broth 產品規格：250g

支原體肉湯培養基 英文名稱：Mycoplasma Broth Medium 產品規格：250g

支原體肉湯培養基（不含瓊脂和酚紅） 英文名稱：Mycoplasma Broth Medium 產品規格：250g

支原體瓊脂培養基（含） 英文名稱：Mycoplasma Agar Base 產品規格：250g

PPLO瓊脂 英文名稱：PPLO Agar 產品規格：250g

支原體半流培養基 英文名稱：Mycoplasma Semi-fluid Medium 產品規格：250g

支原體肉湯培養基 英文名稱：Arginine Mycoplasma Broth Meium 產品規格：250g

豬支原體培養基 英文名稱：Pig Mycoplasma Base 產品規格：250g

支原體瓊脂培養基 英文名稱：Mycoplasma Agar Medium 產品規格：250g

支原體培養基 英文名稱：Mycoplasma Medium 產品規格：250g

C918(眼脈絡黑色素瘤細胞)聚甲銨酯I 規格： 200mg

環戊噻嗪 規格： 50mg

81-25-4膽;Cholic acid 規格： 200mg

491-50-9槲皮-7-O-BETA-D-吡喃 規格： HPLC≥98%,10mg/vial

8008-99-9大蒜 規格： 0.5ml

5945-50-6晶蘭;motropein 規格： 20mg

65497-07-6商陸皂甲 規格： 20mg

Oroxin B木蝴蝶B; 木蝴蝶甙B 規格： HPLC≥98%,20mg/支

金色酰胺酯 規格： HPLC≥98%;10mg

3254-89-5地芬多 規格： 100mg

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。