標簽選擇:
親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據具體案例來分析。
不同的系統步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:
真核表達系統的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達載體的構建
c. 無內毒素的質粒抽提
d. 細胞瞬時轉染
e. 表達小試,條件優化
f. 表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
僅供科研實驗產品屬性:
產品名稱 | 物種 | 性狀 | 來源 |
二-N-乙酰殼二糖酶(CTBS)重組蛋白 | Homo sapiens (Human,人) | 凍干粉 | 原核表達 |
英文名稱:Recombinant Di-N-Acetyl Chitobiase (CTBS)
CTB
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,人)
來源:原核表達
宿主E.coli
內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::n/a
預測分子量:42.6kDa
實際分子量:43kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:Glu47~Arg385 with
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點:-
應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
相關產品:
F1 operon positive regulatory protein(NT 0.5mgF1 operon positive regulatory protein(NT) 鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(N端多肽)
ALDH4A1 Protein Human 重組人 ALDH4A1 蛋白 (His & GST 標簽)
SEMA4D重組大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 (Fc 標簽) Protein
EFNA1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A1
原核表達系統的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體
b. 密碼子優化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉化表達菌株
e. 蛋白表達小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復性來制備可溶蛋白。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白;表達蛋白的分析、純化、檢測
誘導表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。
操作步驟 :
根據使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現用現加)。
1、樣品前處理:
a)對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
高地病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Highlands J VirusJRTPCR 50T
肝胰腺細小病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Hepatopancreatic Parvovirus(HPV)PCR 50T
伽氏疏PCR檢測試劑盒 英文名稱; Borrelia gariniiPCR 50T
副流感病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Parainfluenza Virus(PIV)RTPCR 50T
MSP 人巨噬細胞刺激因子Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-Cytochrome C 抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Neurotensin/NTS 神經緊張素抗體 規格 0.1ml
Human Thyroglobulin,TG ELISA Kit 人甲狀腺球蛋白 96T
TLR8 英文名稱: Toll樣受體8抗體 0.1ml
CD66a 英文名稱: 癌胚抗原相關細胞粘附分子1抗體 0.2ml
Anti-Cytochrome C 抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
二-N-乙酰殼二糖酶(CTBS)重組蛋白坎氏弧菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Vibrio campbelliiPCR
堪薩斯分枝桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycobacterium kansasiiPCR
卡他莫拉菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Moraxella catarrhalisPCR
卡氏住白細胞原蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Leucocytozoon caulleryiPCR
注意事項:
1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。
2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙。分子間交聯形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續操作。
4、本產品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作