血紅蛋白（HM）是紅細胞中的含鐵氧轉運蛋白。它吸收氧氣并將其輸送到組織以維持細胞的存活率。血紅蛋白的每個亞基都是球狀蛋白具有嵌入的血紅素基團。每個血紅素基團都含有一個鐵原子，負責結合氧氣。血紅蛋白減少會導致貧血癥狀。

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血紅蛋白(馬)ELISA試劑盒，96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定（ELISA）的原理在圖1中表示。在這種測定中，樣品中的血紅蛋白與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗血紅蛋白抗體反應。通過洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗HM抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的HM形成復合物。經過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB），測定免疫吸附劑上結合的酶。結合的酶量與測試樣品中HM的濃度直接相關；450納米處的吸光度是測試樣品中HM濃度的量度。測試樣品中HM的量可以從標準曲線中插值得出，并根據樣品稀釋進行校正。

試劑（足夠96次測定的數量）

稀釋液濃縮液（測定緩沖液） 一瓶含有50毫升5倍濃縮的稀釋測定緩沖液。

洗滌液濃縮液 一瓶含有50毫升20倍濃縮的洗滌液。

酶-抗體結合物100倍 一瓶含有150微升與辣根過氧化物酶結合的親和純化抗馬血紅蛋白抗體，在穩定緩沖液中。

顯色底物溶液 一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）和過氧化氫，在檸檬酸緩沖液中，pH值為3.3。

終止液 一瓶含有12毫升0.3摩爾硫酸。警告：避免與皮膚接觸。

抗馬血紅蛋白ELISA微孔板 十二個可移動的八（8）孔微孔條在孔架框架中。每個孔都涂有親和純化的抗馬血紅蛋白。

馬血紅蛋白校準液 一瓶含有馬血紅蛋白校準液。

試劑準備

稀釋液濃縮液

提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1/5。

洗滌液濃縮液

提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1/20。在儲存溫度較低時，濃縮液中結晶形成并不少見。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶抗體結合物

通過向每個微孔板測試條中添加10微升酶-抗體結合物到990微升1倍稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

顯色底物溶液

按提供狀態使用。

終止液

按提供狀態使用。

抗馬血紅蛋白ELISA微孔板

按提供狀態使用。打開微孔板袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有的條和孔，放回袋中并重新密封。

馬血紅蛋白校準液

校準液現在的濃度為272.4微克/毫升馬血紅蛋白標準品需要在使用前立即準備（見下表）。每步之間充分混合。避免起泡。

未提供的所需材料

精密移液器（2至200微升），用于制備和分發稀釋液

試管

微孔板洗滌器/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀取器

用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

計時器

離心機（用于樣本準備）

抗凝劑（用于樣本準備）

測定協議

樣本稀釋

測定樣本中血紅蛋白的定量需要在測試前對每個測試樣本進行稀釋。對于大多數血清/血漿樣本，單步測定1/5,000的稀釋是合適的。對于絕對定量，如果樣本產生的結果超出標準曲線的范圍，可能需要進行更小或更大的稀釋。

為了準備1/5,000的樣本稀釋，將5微升的樣本轉移到495微升的1倍稀釋液中。這會產生1/100的稀釋。接下來，將10微升的1/100稀釋樣本加入到490微升的1倍稀釋液中。這會產生1/5,000的樣本稀釋。在每個階段c底混合。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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