雌二醇（E2或17β-雌二醇）是由卵巢產生的一種雌性激素，腎上腺皮質和睪丸也會產生少量。它是有效的女性性激素，對于維持正常的女性功能至關重要。在發情周期中，該周期可以分為四個階段（前發情期、發情期、間情期、休情期），雌二醇濃度從間情期逐漸上升至前發情期，在發情期降至幾乎無法檢測的水平。前發情期的中午時分達到最大濃度（1,2）。除了對性特征的影響外，它對大腦的生長和發育也有重要影響（3,4）。在雌性嚙齒動物中，雌二醇的測定是評估和監測生殖功能和妊娠狀態的有用標志。

雌二醇大鼠ELISA是一種競爭性免疫分析，用于大鼠血清中雌二醇的定量測量。僅供研究使用。

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雌二醇大鼠ELISA, 96孔檢測原理：

雌二醇大鼠ELISA試劑盒是一種基于競爭性結合原理的固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。微量滴定孔涂有抗雌二醇抗體。樣品中存在的未知量的雌二醇與雌二醇-辣根過氧化物酶偶聯物競爭與包被抗體的結合。孵育后，未結合的結合物被洗掉。結合的過氧化物酶結合物的量與樣品中雌二醇的濃度成反比。加入底物溶液后，顯色強度與樣品中游離雌二醇的濃度成反比。

一般說明

? 使用前必須讓所有試劑和樣本達到室溫。所有試劑混合時不得產生泡沫。

? 一旦開始測試，所有步驟都應連續完成，不得中斷。

? 為避免交叉污染，每個標準品、對照品或樣本都應使用新的一次性塑料移液器槍頭。

? 吸光度是孵育時間和溫度的函數。開始檢測前，建議所有試劑準備就緒，移除蓋子，所有需要的孔位固定在支架中等。這將確保每個移液步驟的間隔時間相等，且無中斷。

? 作為一般規則，酶促反應與時間和溫度成正比。

? 嚴格遵守本使用說明書中規定的孵育時間。

? 建議對校準品、對照品和樣本進行雙重測定，以識別可能的移液錯誤。

? 每次運行都必須建立標準曲線。

? 微孔板洗滌很重要。洗滌不當的孔會產生錯誤的結果。建議使用多通道移液器或多步移液器，或自動微孔板洗滌系統。在孵育之間不要讓孔干燥。在沖洗和抽吸過程中不要刮傷包被的孔。仔細沖洗和填充所有試劑。在沖洗時，檢查所有孔是否都精確地填充了洗滌液，孔中是否有殘留物。

檢測程序

1. 準備足夠數量的微孔板孔，以容納雙重測定的標準品和樣本。

2. 使用新的一次性槍頭，向相應的孔中分配75 ?L的每個校準品和樣本。

3. 向每個孔中分配50 ?L的孵育緩沖液。

4. 在室溫（18-25°C）下，在板式搖床上（900轉/分鐘）孵育120分鐘。重要說明：此檢測中的最佳反應明顯依賴于微孔板的搖動！

5. 使用前，將酶結合物濃縮物以1:100的比例稀釋于酶結合物稀釋液中。向每個孔中加入50 ?L稀釋后的酶結合物。

6. 在室溫（18-25°C）下，在板式搖床上（900轉/分鐘）孵育60分鐘。重要說明：此檢測中的最佳反應明顯依賴于微孔板的搖動！

7. 丟棄孔中的內容物，并用稀釋的洗滌液（每個孔300?L）沖洗孔4次。通過將微孔板輕敲在吸水紙上，盡可能去除洗滌液。

8. 向每個孔中加入200 ?L的底物溶液。

9. 在黑暗中不搖動孵育30分鐘。

10. 通過向每個孔中加入50 ?L的停止液來終止反應。

11. 測定每個孔在450 nm處的吸光度。建議在加入停止液后15分鐘內讀取孔的吸光度。

文獻參考：

1. Abubakar A. Shaikh. Estrone and estradiol levels in the ovarian venous blood from rat duringthe estrous cycle and pregnancy; Biology of Reproduction (1971); 5, 297 - 307.

2. Hawkins, R.A, Freedman, A., Marshall, A., Killen, E. Oestradiol-17β and prolactin levels in ratperipheral plasma; Br. J. Cancer (1975); 32, 179.

3. Zamani, M.R, Desmond, N.L, Levy, W.B.. Estradiol modulates long term synaptic depression infemale rat hippocampus. J. Neurophysiol (2000); 84: 1800 - 1808.

4. McCarthy, M.M. Estradiol and the developing brain; Physiol. Rev. (2008); 88: 91-134.

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