測量KLH（匙孔血藍蛋白）誘導的抗KLH抗體水平可以定量評估免疫反應（參考文獻1）。本ELISA試劑盒用于快速定量測量血清或血漿中的小鼠抗KLH IgG水平。另一款配套的ELISA試劑盒，貨號KA2461，用于測量小鼠抗KLH IgM水平。

KLH IgG（小鼠）ELISA試劑盒用于定量測量血漿和血清中的KLH IgG。

艾美捷KLH IgG(小鼠)ELISA試劑盒：

貨號：KA2460

校準范圍：6.25至100 µg/mL

適用樣本：血漿、血清

樣本體積：100 µL

標記：HRP結合物

檢測方法：比色法

監管狀態：僅供研究使用（RUO）

測定類型：定量

反應性：小鼠

應用：定量

儲存說明：將凍干標準品儲存于-20℃。將所有其他組分儲存于4℃。

僅供研究使用（RUO）

測定原理：

KLH IgG（小鼠）ELISA試劑盒基于固相酶聯免疫吸附測定（ELISA）。該測定使用KLH進行固相（微孔板孔）固定，以及辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗小鼠IgG抗體進行檢測。將測試血清或血漿樣本稀釋后，在微孔板孔中孵育1小時。隨后洗滌微孔板孔，加入HRP結合物并孵育45分鐘?？?span style="font-family: Calibri;">KLH IgG分子因此被固定化的KLH和檢測抗體結合物夾在中間。然后洗滌孔以去除未結合的HRP標記抗體，并加入TMB試劑，在室溫下孵育20分鐘。這將導致藍色顏色的產生。通過加入終止液停止顏色發展，顏色變為黃色。在450 nm處用分光光度計測量吸光度?？?span style="font-family: Calibri;">KLH IgG的濃度與測試樣本的吸光度成正比。

儲存說明：

參考標準品應儲存于-20℃以保持最佳穩定性。

所有剩余試劑盒組分應儲存于4℃。

微孔板應與干燥劑一起密封保存，以盡量減少暴露于潮濕空氣。

如果按照上述說明儲存，試劑盒自購買之日起六個月有效。

所需材料但未提供：

精確移液器和槍頭

蒸餾水或去離子水

聚丙烯或玻璃管

渦旋混合器

吸水紙或紙巾

微孔板孵育/振蕩器，混合速度為150 rpm

平板洗滌器

具有0-4吸光度范圍的450 nm平板讀數器

圖表紙（可選PC繪圖軟件）

使用注意事項：

一般說明

僅供研究使用，不用于診斷目的。

在使用試劑盒之前，請仔細閱讀并理解說明書。

本試劑盒旨在測量免疫KLH后14天獲得的小鼠血清或血漿中的抗KLH IgG水平。

所有試劑在使用前應放置至室溫（25℃）。

應通過實驗確定最佳樣本稀釋度。然而，研究表明，對于大多數14天后免疫樣本，初始樣本稀釋度為20,000倍效果良好。請勿使用小于25倍的稀釋度。

如果在每個步驟中，試劑在5分鐘內加入微孔板的孔中，則可獲得最佳結果。

操作限制：

當按照詳細說明完整理解并執行測定程序時，將獲得可靠且可重復的結果。

洗滌步驟至關重要。洗滌不足會導致精密度差和吸光度讀數虛高。

試劑準備：

洗滌液準備

提供的洗滌液為20倍濃縮液。使用前，將瓶中內容物（50 mL）與950 mL蒸餾水或去離子水稀釋。

標準品準備

小鼠抗KLH IgG標準品為凍干儲備液。用100 μL蒸餾水或去離子水復溶（復溶后的標準品在4℃下穩定一周，但如需日后使用，應分裝并冷凍于-20℃）。

標記5個聚丙烯或玻璃管，分別為100、50、25、12.5和6.25單位/mL（u/mL）。

在標記為100 u/mL的管中，加入抗KLH IgG標準瓶標簽上詳細說明的稀釋液體積。然后加入指示體積的抗KLH IgG標準品（顯示在抗KLH IgG標準瓶標簽上）并輕輕混合。這提供了100 u/mL的標準品。

向標記為50、25、12.5和6.25 u/mL的管中各加入250 μL稀釋液。

通過將100 u/mL標準品250 μL與標記為50 u/mL的管中的250 μL稀釋液混合稀釋，制備50 u/mL標準品。

同樣通過連續稀釋法制備25、12.5和6.25 u/mL的標準品。

樣本準備：

一般說明：研究表明，KLH免疫小鼠血清中抗KLH IgG的濃度約為750,000 u/mL。為了獲得在標準曲線范圍內的數值，我們建議樣本初次稀釋20,000倍，使用以下程序對每個待測樣本進行操作：

分別向不同的管中加入248 μL和318 μL稀釋液。

將2 μL血清樣本加入含有248 μL稀釋液的管中，混勻。這提供了125倍稀釋的樣本。

將2 μL 125倍稀釋的樣本與第二管中的318 μL稀釋液混合。這提供了樣本的20,000倍稀釋。

對每個待測樣本重復此程序。

標準曲線僅用于說明，不應用于計算未知量。每次進行測定時，應生成標準曲線。

文獻參考：

1. Wada H, Noguchi Y, Marino MW, Dunn AR and Old LJ. T-cell functions in granulocyte/macrophage colony-stimulating factor deficient mice. Proc Natl Acad Sci. 94:12557-61 (1997).