ADI猴IgM ELISA試劑盒標(biāo)本的采集和處理：

通過靜脈穿刺采集血液，使其凝固，并在室溫下離心分離血清溫度。不要加熱使血清失活。如果血清沒有立即檢測，請儲存冷藏長達2周或冷凍長期儲存。避免凍融循環(huán)。血漿的使用尚未進行調(diào)查，但應(yīng)該是一個合適的檢測樣本。

艾美捷猴IgM ELISA試劑盒：

貨號：ADI-7060

特異性：本試劑盒中使用的抗體已通過免疫電泳和ELISA證明能特異性地與IgM反應(yīng)，并且與IgG、IgA、IgE或其他任何猴血清蛋白幾乎沒有反應(yīng)性。

以下物種的血清在1:400稀釋下沒有顯示出顯著的反應(yīng)性：

小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、牛、豬、馬、羊、山羊、狗、貓、兔子或雞；還有10%的新生牛血清。人血清顯示出廣泛的交叉反應(yīng)性。

正常范圍：對14只個體恒河猴、食蟹猴和狒狒的儲存血清中的IgM進行檢測，其范圍從0.2到3.8 mg/ml（中位數(shù)=1.85 mg/ml）。每個實驗室應(yīng)確定其自身測試群體的預(yù)期值。

精確度：含有低、中、高濃度IgM的樣本，代表3個不同物種，在同一個檢測中多次檢測（n=10）以提供檢測內(nèi)的精確度，并作為多個檢測中的重復(fù)樣本（n=5）以獲得檢測間的可重復(fù)性。使用點對點曲線擬合程序計算濃度的變異系數(shù)。

IgM濃度的測量顯示出良好的檢測內(nèi)（5.3至7.8% CV）和檢測間（4.2至16.2% CV）的可重復(fù)性。

檢測程序：

將所有試劑平衡至實驗室溫度（18-30攝氏度）至少30分鐘。

稀釋血清樣本至工作樣本稀釋液中。對于大多數(shù)正常的猴血清，大約4000倍的稀釋是合適的。為了準(zhǔn)確性，推薦進行兩個稀釋步驟，如下：

1) 10μl血清 + 990μl稀釋液 = [1:100]，

2) 25μl [1:100] + 975μl稀釋液 = [1:4000]。

不要稀釋標(biāo)準(zhǔn)品或陽性對照血清。

結(jié)果計算：

1. 結(jié)果可以使用任何免疫分析軟件包來計算。推薦使用四參數(shù)曲線擬合。如果沒有軟件可用，可以按照以下方法確定IgM濃度：

2. 計算重復(fù)樣本的平均OD值。

3. 在坐標(biāo)紙上，將標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值（y軸）與IgM的濃度（ng/ml）（x軸）作圖。通過這些點繪制最佳擬合曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。點對點的構(gòu)建是最常見和可靠的方法。

4. 可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的插值來確定未知樣本和對照中的IgM濃度。

5. 將樣本獲得的值乘以每個樣本的稀釋因子。

6. 對于產(chǎn)生高于1000 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)信號的樣本，應(yīng)進一步稀釋并重新檢測。

注意事項和安全指南：

猴血清可能含有人畜共患的、跨物種的傳染性物質(zhì)。在處理含有血清的樣本（包括標(biāo)準(zhǔn)品和對照品）時，始終要戴手套，并把這些樣本和容器作為生物危害廢物進行處理。

校準(zhǔn)液、樣品稀釋液和HRP標(biāo)記抗體含有溴硝基二氧六環(huán)（BND：0.05%，重量/體積）。

終止液含有稀釋的硫酸。請遵循良好的實驗室操作規(guī)范，避免任何試劑與皮膚、眼睛或黏膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。TMB、硫酸和BND的MSDS（材料安全數(shù)據(jù)表）可以從ADI網(wǎng)站索取或獲得：樣品稀釋液和抗蛋白G-HRP含有Proclin 300（0.05%，體積/體積）。

質(zhì)量控制：

準(zhǔn)確和可重復(fù)的檢測結(jié)果依賴于試劑和樣本的正確儲存、處理以及溫度控制。按照指示儲存所有試劑，并僅將用于檢測的試劑回暖至室溫。關(guān)鍵試劑和樣本的保質(zhì)期會因長時間暴露在非冷藏條件下而縮短，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

所有溶液應(yīng)清澈。渾濁或有顆粒物是試劑污染或不穩(wěn)定的跡象，可能會干擾檢測的正確進行。如出現(xiàn)這種情況，請勿使用。

樣本對照品 試劑盒中提供了一個陽性血清對照品，并附有IgM濃度值范圍。在此范圍內(nèi)的回收率是檢測性能良好的指標(biāo)。

每個實驗室還應(yīng)檢測內(nèi)部對照樣本，這些樣本代表實驗室預(yù)期的樣本群體，并且是穩(wěn)定的。也應(yīng)該運行一個樣品稀釋液陰性對照。

標(biāo)準(zhǔn)曲線 標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的信號應(yīng)該從低標(biāo)準(zhǔn)品到最高標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)增加OD值，且差異大于1.2 OD。

非連續(xù)增加或低信號可能表明技術(shù)、協(xié)議指導(dǎo)和/或試劑準(zhǔn)備、使用或穩(wěn)定性存在問題。陰性稀釋液對照的信號應(yīng)低于低標(biāo)準(zhǔn)品。不要依賴于存在這些問題的檢測結(jié)果。

技術(shù) 準(zhǔn)確和可重復(fù)的檢測結(jié)果依賴于良好的實驗室技術(shù)，包括移液、板洗滌和樣本及試劑的處理。