Sirius紅是一種d特的染料，能特異性結合到纖維狀膠原蛋白（I型至V型）的Gly-X-Y 螺旋結構上，并且不會區分膠原蛋白的種類和類型。Chondrex, Inc.提供Sirius紅總膠原蛋白檢測試劑盒，用于檢測各種含膠原蛋白樣本中的總膠原蛋白含量，如組織標本、細胞培養基和培養細胞。總檢測時間不到30分鐘，可以對40個樣本進行重復測量。由于細胞培養基中膠原蛋白含量較低，可能需要額外的濃縮步驟。為了測定來自不同物種或不同類型樣本的膠原蛋白水平，Chondrex, Inc.推薦使用我們的I型膠原蛋白檢測ELISA試劑盒和II型膠原蛋白檢測ELISA試劑盒。為方便起見，Collagen Detection ELISA試劑盒和Sirius紅總膠原蛋白檢測試劑盒可以使用相同的樣本制備。

艾美捷天狼星紅總膠原檢測試劑盒：

貨號：9062

描述：用于定量樣本中總膠原蛋白含量的檢測試劑盒

格式：帶可拆卸條的96孔ELISA板

檢測類型：比色法檢測

檢測時間：30分鐘

標準范圍：500 µg/ml至8 µg/ml

樣本數量：每板可處理最多40個（重復）樣本

樣本類型：組織勻漿、細胞培養基和培養細胞

推薦樣本稀釋：根據樣本類型而異

色素：不適用（在510-550 nm下讀取）

儲存條件：-20°C保存12個月

天狼猩紅膠原蛋白染色試劑盒試劑盒內容：

項目 數量 金額 存儲條件

標準 - 牛源I型膠原蛋白（90621） 1小瓶 0.5毫克/毫升，1毫升 -20°C

Sirius Red溶液（90622） 1瓶 50毫升 -20°C

洗滌溶液（90623） 1瓶 50毫升 -20°C/*

提取溶液（90624） 1瓶 30毫升 -20°C/*

0.5M醋酸（10倍醋酸）（90625） 1瓶 20毫升 -20°C/*

96孔板（9026） 1個 8孔條 x 12 -20°C/*

*洗滌液、提取液、0.5M醋酸和板也可以在室溫下儲存。不包括用于細胞培養基樣品的濃縮溶液（目錄號90626）。

培養基：

含有較高濃度血清的樣本可能會導致高背景值。因此，Chondrex公司建議將細胞培養基中的血清補充濃度降低至5%，使用PBS稀釋。

樣本濃縮：

培養基中膠原蛋白的濃度通常較低，因此在該試劑盒的標準范圍內檢測培養基樣本中的膠原蛋白是困難的。Chondrex公司推薦使用我們的濃縮溶液（產品編號90626）進行樣本濃縮。此外，應使用培養基作為陰性對照，因為這種濃縮方法可能會導致背景水平升高。

1. 取1毫升培養基。

2. 添加250微升濃縮溶液。

3. 震蕩混勻，并在4°C下孵育16-24小時。

4. 以10,000轉/分鐘的速度離心3分鐘。

5. 丟棄上清液。

6. 添加100微升0.05M醋酸溶液以溶解沉淀。將此溶液作為樣本使用。

7. 計算的膠原蛋白濃度應乘以0.1的稀釋因子。

化驗大綱：

天狼星紅總膠原檢測試劑盒文獻參考：

Chothani S et al., Widespread Translational Control of Fibrosis in the Human Heart by RNA-Binding Proteins. Circulation 140(11):937-951, (2019). PMID: 31284728

Widjaja AA et al., IL-11 neutralising therapies target hepatic stellate cell-induced liver inflammation and fibrosis in NASH. Gastroenterology 157 (3), 777–792.e714, (2019). PMID: 31078624

Schafer S et al., IL-11 is a crucial determinant of cardiovascular fibrosis. Nature 552, 110-115, (2017). PMID: 29160304

Schanaider A et al., Exogenous pulmonary surfactant prevents the development of intra-abdominal adhesions in rats. J Cell Mol Med 20, 632-43 (2016).