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檢測系統：二手高效液相色譜的檢測器很多，常用的有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器等。
1，紫外檢測器
紫外檢測器是二手液相色譜中應用廣泛的檢測器，適用有紫外吸收物質的檢測。在進行高效液相色譜分析的樣品中，約有80％的樣品可以使用這種檢測器。
紫外檢測器的工作原理如下：由光源產生波長連續可調的紫外光或可見光，經過透鏡和遮光板變成兩束平行光，無樣品通過時，參比池和樣品池通過的光強度相等，光電管輸出相同，無信號產生；有樣品通過時，由于樣品對光的吸收，參比池和樣品池通過的光強度不相等，有信號產生。根據朗伯—比爾定律，樣品濃度越大，產生的信號越大， 這種檢測器靈敏度高，檢測下限約為 10(-10) g／ml，而且線性范圍廣，對溫度和流速不敏感，適于進行梯度洗脫。
2，示差折光檢測器
示差折光檢測器是根據不同物質具有不同折射率來進行組分檢測的。凡是具有與流動相折射率不同的組分，二手液相色譜均可以使用這種檢測器。如果流動相選擇適當，可以檢測所有的樣品組分。
示差折光檢測器分為反射式和沂射式兩種。反射式示差折光檢測器是根據下述原理制成的：光在兩種不同物質界面的反射百分率與入射角和兩種物質的折射率成正比。如果入射角固定，光線反射百分率僅與這兩種物質的沂射率成正比。光通過僅有流動相的參比池時，由于流動相組成不變，故其折射率是固定的；光通過工作池時，由于存在待測組分而使折射串改變，從而引起光強度的變化，測量光強度的變化，即可測出該組分濃度的變化。偏轉式示差折光檢測器是根據下述原理：當一束光透過折射率不同的兩種物質時，此光束會發生一定程度的偏轉，其偏轉程度正比于兩物質折射率之差。
示差折光檢測器的優點是通用性強，操作簡便；缺點是靈敏度低，小檢出限約為 10(-7)g/ml ，不能做痕量分析。此外，由于洗脫液組成的變化會使折射率變化很大，因此，這種檢測器也不適用于梯度洗脫。
3，熒光檢測器
物質的分子或原子經光照射后，有些電子被激發至較高的能級，這些電子從高能級 躍至低能級時，物質會發出比入射光波長較 長的光，這種光稱為熒光。在其他條件一定的情況下，熒光強度與物質的濃度成正比。許多有機化合物具有天然熒光活性，另外，有些化合物可以利用柱后反應法或柱前反應法加入熒光化試劑，使其轉化為具有熒光活性的衍生物。在紫外光激發下，熒光活性物質產生熒光，由光電倍增管轉變為電信號。
熒光檢測器是一種選擇性檢測器，它適合于二手液相色譜測定稠環芳烴、氨基酸、胺類、維生素、蛋 白質等熒光物質。這種檢測器靈敏度非常高，其檢出限可達10(-12)_10 (-13)g/ml，比紫外檢測器高2—3個數量級，適合于痕量分析 。而且可以用于梯度洗脫。其缺點是適用范圍有一定的局限性。