了解高效液相色譜的裝置
高效液相色譜的裝置主要有:輸液泵,色譜柱,進樣器,檢測器,餾分收集器,數據獲取和處理系統等。
(一)輸液泵:泵是一套高效液相色譜設備中重要的單元部件,是驅動溶劑和樣品通過色譜分離柱和檢測系統的高壓源,其性能好壞直接影響整個儀器和分析結果的可靠性。用于分析目的的泵應當流量穩定、耐高壓(30—60MPa)、耐各種流動相,如有機溶劑、水和緩沖液。目前,商品高效液相色譜儀普遍采用體積小、方便多用的往復泵和隔膜泵。
(二)色譜柱:色譜柱是色譜儀的心臟,色譜的核心問題分離是在色譜儀中進行的。為適應不同的分離分析要求,色譜柱有不同的柱型,內裝不同性質的填料。常使用的色譜柱是10~30cm長,2~5mm內徑的內壁拋光的不銹鋼管柱,內裝5~10μm高效微粒固定相,采用高壓勻漿裝柱技術填充。相同柱長的效率遠遠高于氣相色譜,例如2mm細內徑柱、250cm長的5μm YWG硅膠柱柱效可達20000理論塔板數,而5μm YQG—CH反相鍵合相柱效可達14000理論塔板數。高效色譜柱的填充需要特殊的設備和技術,各色譜儀和色譜產品廠家均提供預裝柱。
(三)進樣器:待分析樣品從柱頭進樣器引入的方式可分為注射器進樣、停流進樣、閥進樣和自動進樣器進樣四種,其中注射器進樣和閥進樣常用。在10MPa以下的進口壓力可用1~10μL的微量注射器進樣,一般能獲得高的柱效率,但進樣重復性不佳,特別是在較高壓力下。閥進樣時進樣體積可變也可以固定,但柱效會受些影響。自動進樣器適合于多樣品重復操作,便于用微處理機控制,實現自動化。
(四)檢測器:被分析組分在柱流出液中濃度的變化可通過檢測器轉化為光學的或電學的信號而被檢出,從而完成定性定量任務。HPLC常用的檢測器包括示差折光檢測器(RI)、紫外檢測器(UV)、熒光檢測器和電化學檢測器。色譜柱的恒溫控制不必每臺必配,許多場合下色譜柱和檢測器在環境溫度下使用即能滿足要求。為了增加柱效、改善分離或者是為了取得更準確的熱力學數據,有時在較高溫度下恒溫操作。紫外檢測器經恒溫控制后有利于增加穩定性。
(五)餾分收集器:如果所進行的色譜分離不是為了純粹的色譜分析,而是為了做其他波譜鑒定,或獲取少量試驗樣品,就需要進行餾分收集。用小試管收集,手工操作只適合于少數幾個餾分,手續繁瑣,易出差錯。使用餾分收集器進行餾分收集,便于用微處理機控制,按預先規定好的程序,或按時間,或按色譜峰的起落信號逐一收集和重復多次收集。
(六)數據獲取和處理系統:把檢測器的信號顯示出來的數據系統有多種形式。電位差式長圖記錄器,記錄信號隨時問變化,得到色譜流出曲線或色譜圖。采用積分儀可以進行定性定量,記錄保留時間和峰面積。*的反相液相色譜儀多用微處理機控制,微計算機一是作為數據處理機,輸入定量校正因子,按預先選定的定量方法(歸一化、內標法和外標法等),將面積積分數換算成實際的成分分析結果,或者給出某些色譜參數;二是作為控制機,控制整個儀器的運轉,按預先編好的程序控制沖洗劑的選擇、梯度淋洗、流速、柱溫、檢測波長、進樣和數據處理。所有指令和數據通過鍵盤輸入,結果在陰極射線管或繪圖打印機上顯示出來。更新一代的色譜儀,應當具有某些人工智能的特點,即能根據已有的規律自動選擇操作條件,根據規律和已知的數據、信息進行判斷,給出定性定量結果。