關于液氮研磨的步驟分析
液氮研磨原理:分子生物學是當前生命科學領域的前沿學科,其理論與技術已滲透到各學科領域,而分子生物學實驗在生命科學研究中顯得相當重要。在實際工作中,許多實驗材料比如動物身上的肌肉組織、結締組織、骨組織、毛發組織等,植物的根、莖、葉、種子等均需磨碎,隨后才能對其成分、基因與蛋白質及結構和功能進行研究。
液氮研磨在分子生物學實驗中應用廣泛,特別是有關核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)的分離。液氮的溫度為一196℃,它既能使各種組織成分不易被破壞或降解,又能使組織變硬,脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的溫度極低,操作時要特別小心。
液氮研磨步驟:
1、將研缽從烘箱內拿出,用專用容器盛一些液氮備用;
2、將液氮小心加入并浸滿研缽,浸泡預冷研杵與研缽(加入液氮時,緩慢加入,防止液氮飛濺);
3、當第一次加入的液氮揮發*后,立即向研缽中緩慢加入約1/2研缽體積的液氮(若組織塊較大或較多的情況下可浸滿研缽),將組織迅速轉移至液氮內,確保組織全部浸沒在液氮中;
4、使用研杵在液氮中輕輕敲打組織,將組織打碎成小塊,要注意切勿用力過度,要防止組織塊飛濺出研缽;在液氮即將揮發完時,使用研杵對組織樣本進行碾壓研磨(注意,若為植物樣本可直接用研杵碾壓組織);
5、待液氮揮發完后,立即加入1/3研缽體積的液氮(注意,加入液氮速度要緩慢,切勿使得液氮沖擊力過大,將組織樣本沖出研缽),迅速用研杵研磨組織,根據組織狀態的變化程度,在確保組織始終處于冰凍狀態下,及時補充液氮進行研磨,(一般30s~1min補充一次,至少需要補充3次以上),直至組織被研磨成粉末狀。
6、當組織研磨成粉末狀后立即加入合適體積的裂解液進行組織裂解,若裂解液凍于研缽內壁,用研杵輕輕敲擊下來,繼續研磨讓組織粉末與裂解液充分混合,研磨成糊狀后進行下一個樣本的取樣操作;
7、靜置至樣本和裂解液混合物融化,將已經融化成液體狀態的樣本轉移至離心管中,插入冰塊上暫存。